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細胞免疫染色で固定後細胞が剥がれる トピック削除
No.980-TOPIC - 2009/08/04 (火) 14:06:30 - komattakun
神経細胞らしきものを免染するために、ornithine/lamininコートした組織培養用プレートに培養後4％PFAで固定し洗浄するとペロッと剥がれてしまいます。2％ glutalaldehydeにすると非特異反応が増加し抗原性が失われてしまうようです。どなたか細胞が剥がれずにうまく固定する方法をご存知であれば教えてください。
　
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(無題) 削除/引用
No.980-4 - 2009/08/04 (火) 21:47:46 - 通りすがり
乾燥後、固定させても染まる場合があります。

もちろんタンパク質や抗体によりますが機会があったらご検討ください。

(無題) 削除/引用
No.980-3 - 2009/08/04 (火) 18:38:38 - komattakun
PAFさんありがとうございます。
普通の接着性の株化細胞や初代神経細胞ですと通常のPAFさんのような条件（固定は15分くらいはしますが）で問題ないのですが、今回の細胞は特殊な細胞のようでシート状にペロッと剥がれてしまいます。もし何かご存知でしたら教えてください。

Ｒｅ：細胞免疫染色で固定後細胞が剥がれる 削除/引用
No.980-2 - 2009/08/04 (火) 14:34:57 - PAF
プロトコールがわかりませんが、私は接着細胞を使っていますが、
1)培養上清を除く、
2)ＰＢＳで1回洗う、
3)４％ＰＡＦ/PBSを入れて、30秒、
4)蒸留水で2回洗う
で、問題なく固定ができ、剥がれたことはありません。

細胞免疫染色で固定後細胞が剥がれる 削除/引用
No.980-1 - 2009/08/04 (火) 14:06:30 - komattakun
神経細胞らしきものを免染するために、ornithine/lamininコートした組織培養用プレートに培養後4％PFAで固定し洗浄するとペロッと剥がれてしまいます。2％ glutalaldehydeにすると非特異反応が増加し抗原性が失われてしまうようです。どなたか細胞が剥がれずにうまく固定する方法をご存知であれば教えてください。
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