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(無題) 削除/引用 No.976-3 - 2009/08/04 (火) 07:49:27 - 通りがかり ttp://www.invitrogen.co.jp/focus/253035.pdf が参考になるかも

(無題) 削除/引用 No.976-2 - 2009/08/04 (火) 06:12:53 - おお 困りましたね。問題はマーカーのインフォメーションがあまり無い ところでしょうか。 えいどうバッファーの違うシステムで流せば、タンパクによって 移動度の違いがでておかしくないと思います。 マーカーにもそれがいえるということだとおもいます。 極論的にはサイズが60kDaの2種類のタンパクを流して、 違う移動度だったとき、どちらを60kDaかという話になってしまいます。 移動度をプロットして全体的に整合せいのあるものを 使えばいいかもしれませんが、バイオラッドの50kDaと インビトロジェンの100kDaが整合性があるから、 50kDaをバイオラッドで100をインビトロジェンでみるのも どうかと思います。 同じメーカーでやればそれなりのフォローアップや コンシダレーションもあると思いますが、、、 たとえばSeeBlue Plus2 Pre-Stained StandardはTRIS-GLYCINE のシステムでも使えることになっているようですから、 ダイの入れ方その他で両方で大きなぶれがないような考慮をしている かもしれませんね。 http://labs.mgb.pitt.edu/gjoerup/seeblueplus2.pdf 答えになってませんね、、、、、

ゲルとサイズマーカー 削除/引用 No.976-1 - 2009/08/04 (火) 04:44:34 - もも NuPAGE Bis-Trisのゲルとそのシステムを使って、タンパクの泳動をしています。 使用するサイズマーカーとサンプルの調整について質問があります。 SeeBlue Plus2 Pre-Stained Standard以外に、試しにbio-radのDual colorとKaleidoscopeも流してみたところ、それぞれ整合性の無いパターンになってしまいました。これはどうしてですか？ bio-radの２つは同じbufferなのでせめてその２つは同じであってほしいのですが、こういうことが起こり得るのでしょうか？ この場合、seeBlue Plus2はNuPAGE用だから、それが正しいと言うことで良いのでしょうか。 （Nupage + biorad markerの常用者がいて疑問なので、他の方の意見をお聞きしたく） Sigma S3401のような2xSample Bufferに調整されてしまったサンプルを流しても結果は得られるのでしょうか。buffer組成がbiorad markerのに近いので、これも奇妙な泳動パターンになる恐れがあるのか、教えて下さい。実はcos7 transfectantを幾サンプルか流したことがあり、チューブリンはすべて同じサイズに見られました。サイズマーカーとも矛盾はありませんでしたが、この場合seeBlueのと比較するのは間違いでしょうか。 （すでにあるサンプルと研究室にあるセットがあっていないためにでてきた問題で、それぞれ正しい組み合わせに戻せばうまくいくと思っているのですが、どうしてこうなるのか、対処方法があるのか、お知恵をおかしください、よろしくお願いいたします。）

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