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non-RIのゲルシフトアッセイ トピック削除
No.957-TOPIC - 2009/07/31 (金) 04:19:57 - ゲルシフトアッセイ初心者
ゲルシフトアッセイ初心者です。
non-RIのゲルシフトアッセイをお試しになられた方の感想をお聞きしたいです。
non-RIのキットとして、InvitrogenからSYBR GreenとSYPRO Rubyの蛍光色素を使ったDNA標識不要なキットが出ていますが、他のビオチン、DIG、あるいはRI標識法と比べ感度などは十分でしょうか?
宜しくお願いします。
 
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ありがとうございました 削除/引用
No.957-3 - 2009/08/03 (月) 07:25:44 - ゲルシフトアッセイ初心者
おお様、返事が遅くなり申し訳ありません。
大変参考になりました。もう一度どの系にするか良く考えてみます。

(無題) 削除/引用
No.957-2 - 2009/07/31 (金) 11:05:43 - おお
一般的に検出系の検出可能量の比較というのは
モレキュラークローニングにまとめて書かれています。
RI、次にAPを使った検出系(いっぱんにDIGや抗体をを介したりして)
つぎにHRPを用いた検出系。でその次が蛍光を使った検出系
ルシフェラーゼなどはどうだったかな、、結構感度いいと思いますが、、、

ピアスがゲルシフトようキットを売っていますが、
HRPでルミノール(誘導体)発光を検出する系ですが、この
キットの検出系はAPより勝っていると彼らは言っているようです。
たしかに非常に強いルミノール誘導体が開発されてきている
ようです。

そう言う事で使ったことはないので微妙ですが蛍光での検出系は
そんなに感度は高くないのではというのが感触です。

感度が低いからダメといっている訳ではなくて、使いようだと思いますので
適切とおもわれるものをお選びください。

お示しのキットについてですが、
SYBR GreenとSYPRO Rubyと言う事なので、タンパクと核酸を検出して
重なっているバンドを探しなさいということなんでしょうかね、、、

クルードな各抽出物だったら、至るところにタンパクのバンドが検出される
かなぁっておもったりします。

non-RIのゲルシフトアッセイ 削除/引用
No.957-1 - 2009/07/31 (金) 04:19:57 - ゲルシフトアッセイ初心者
ゲルシフトアッセイ初心者です。
non-RIのゲルシフトアッセイをお試しになられた方の感想をお聞きしたいです。
non-RIのキットとして、InvitrogenからSYBR GreenとSYPRO Rubyの蛍光色素を使ったDNA標識不要なキットが出ていますが、他のビオチン、DIG、あるいはRI標識法と比べ感度などは十分でしょうか?
宜しくお願いします。

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