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(無題) 削除/引用 No.955-7 - 2009/08/03 (月) 16:36:36 - 中年 必要なのはDNAなんですか？RNAなんですか？

(無題) 削除/引用 No.955-6 - 2009/08/03 (月) 05:53:09 - おお >[Re:5] ヒッポラさんは書きました : > 皆さん、ご意見を有難うございます。おおさん、次回その手でDNA抽出を行ってみます。バラつくのは発現量の結果です。実験上はサンプルの週令や個別臓器のウェット重量、細かい操作手順を合わせてますので、発現量の結果がバラつくのはえらいストレスです。 > PARIS(Protein And RNA Isolation System)も買ってもらえるなら検討してみます（笑）。 もう少し、詳しくデーターをみて問題点を洗い出ししてみては どうでしょうか? 発現がバラついて見えるのは抽出キット依存と考える理由が ありますか? まずタンパクとRNA両方を解析されていますので、同じ遺伝子産物 を見ているのでしたら、タンパクが低い時RNAは低いでしょうか (RNAとタンパクの変動またはばらつき型はパラレルでしょうか)? タンパクとRNAどちらがバラつきますか? いろいろな視点でみないと問題点を見過ごしてしまうかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.955-5 - 2009/08/01 (土) 17:31:38 - ヒッポラ 皆さん、ご意見を有難うございます。おおさん、次回その手でDNA抽出を行ってみます。バラつくのは発現量の結果です。実験上はサンプルの週令や個別臓器のウェット重量、細かい操作手順を合わせてますので、発現量の結果がバラつくのはえらいストレスです。 PARIS(Protein And RNA Isolation System)も買ってもらえるなら検討してみます（笑）。

(無題) 削除/引用 No.955-4 - 2009/08/01 (土) 11:52:43 - uu PAISkit初めて使いましたが、最後のelutionbufferを95℃にせねばならず やや面倒でした。 それ以外は結果を含め特に気になりません

(無題) 削除/引用 No.955-3 - 2009/08/01 (土) 02:12:05 - 山田 PARISでしたっけ。>ambionのキット 誰か使ったヒトいますか？

(無題) 削除/引用 No.955-2 - 2009/07/31 (金) 02:07:57 - おお 結果がバラつくというのは収量という意味でしょうか? 発現量やその他の結果がバラつくと言う事でしょうか、、、 発現量や結果がバラつく場合は、個体差、組織のheterogenicity プレパーレーションのばらつき(培養細胞ほどタイトにコントロールできないですから) とかそう言うのが原因である可能性がありませんか? トライゾールはメインにRNAを取る試薬でDNAやタンパクも 取れない訳ではありませんが、最初からDNAやタンパクも重要し しているなら、組織を砕いたあと1/3ずつとかにわけ、 DNAはproteinase K 処理ごフェノール、クロロフォルムしょり、 たんぱく質はサンプルバッファーやタンパク抽出用バッファー、 RNAはトライゾールと分けてしまった方がいいと思いますが、、、 たしか最近はサンプルからRNAとタンパク両方とるきっとが何種類か出ている ようですが、、、AMBIONとか売ってたような気がします。

多臓器からのDNA抽出 削除/引用 No.955-1 - 2009/07/31 (金) 01:40:15 - ヒッポラ これまで多臓器(マウス)からの核酸/タンパク抽出にはTrizol使ってきましたが、結果を見る限り、個人的には大雑把な印象があります。ｎ数を取ると結果がバラつくこともしばしです。Trizol以外に多臓器からの核酸/タンパクを良好に抽出可能な方法をご存知でしょうか。

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