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(無題) 削除/引用 No.951-6 - 2009/08/01 (土) 14:01:01 - Tb > permealization/fixする前にPIをしたらだめなのでしょうか？ PIおよび7-AADはfixしたら染色がなくなってしまいます。固定液と反応するのかそれともDNAから抜けるのかよくわかりませんが。。。ですのでInvitrogenのfixation compatibleな死細胞染色剤を使う必要があります。 PMA/IOとかで刺激したりするとかなり細胞が死んだ状態になります。scatterで死細胞はある程度はよけられるし、よい抗体なら死細胞にそんなにノンスペで結合しないので普通は深く気にかけませんが、だめ抗体はベタベタくっつきますので要注意です。これはisotype controlとの比較では判定できません。 昔のトビで少し書いたことがあるのですが、FACS用抗体の最大手の会社がとあるIC用抗体として売り出したものが、実は死細胞をのノンスペで染めていただけということがありました。（幸いなんとか販売中止にもっていけました） 実験していて死細胞へのノンスペが疑われるならぜひdead cell exclusionをしてください。さもないと間違った結論にいってしまう可能性があります。

(無題) 削除/引用 No.951-5 - 2009/08/01 (土) 12:04:13 - uu permealization/fixする前にinvitrogenのlive/dead cell kit?だったと思いますが、それで染めて死細胞を区別しています。各colorが揃っていたと思います。 FACSの実験にはすべてそれを用いて極少の死細胞を除去しています。 permealization/fixする前にPIをしたらだめなのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.951-4 - 2009/07/31 (金) 02:31:53 - Kazu 自家蛍光を有する死細胞はドットプロット(FL-1 vs FL-2)でy=xの直線上に現れるので、上手に除けば、死細胞染色が必須であるということはないと思います。

http:// 削除/引用 No.951-3 - 2009/07/30 (木) 23:40:04 - TK-1 InvitrogenのAquaを使っています。

(無題) 削除/引用 No.951-2 - 2009/07/30 (木) 18:47:19 - う sub-G1、Annexin V、7-AAD等の考察、 培養前後でFSC/SSCのどの部分が増えているのか確認 これらを検討してみるとか。

細胞内染色時の死細胞除去について 削除/引用 No.951-1 - 2009/07/30 (木) 17:30:52 - ミハエルシェンカ お世話になっております。 最近、フローサイトメータで細胞内のタンパク染色を行い解析を行っています。 抗体を細胞表面に反応させて解析する場合は、プロピディウムイオダイド(PI)が 陰性の画分にゲートしていましたが、細胞内染色の場合、細胞に穴があくため、 PIは使えないと思います。こういった場合、7-AAD等で死細胞を除去するのでしょうか。 末梢血単核球を１０日間程培養すると死細胞が結構あり、ノンスペで染まっているのでは ないかと思う場合があります。FSC/SSCで死細胞を除こうと思っても限界があると思います。 皆様、何か良い試薬、方法はありますでしょうか。

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