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(無題) 削除/引用 No.922-6 - 2009/07/28 (火) 13:54:53 - たまご APさん メーカー側にそのような経緯があったのですか。この話だけを聞くと、APさんのおっしゃる通り対応があまりにもお粗末ですね。他のキットを使うときもこういうことがあるということを念頭に置いておいた方が良さそうですね。

(無題) 削除/引用 No.922-5 - 2009/07/25 (土) 19:14:10 - AP 今、最新のマニュアルを確認したら、現在ではNybond-Nシリーズは、固定前にいっさいリンスするな（リンスすることをおすすめしない）と明記されていますね。それに、Hybond-NだけではなくN+もAlkali blot不可に変わっているし。 数年前にナイロンメンブレンのformularを変えてから（おそらく特許がらみで旧来の組成が使えなくなった？）、ごたごた、ばたばたと場当たり的なマニュアル等の変更が繰り返されてきたようですな。 HybondやAmersham（今はGEに吸収されてしまいましたが）は老舗ブランドなんですが、ウェスタンでのECLは高い信頼性と支持を得ていて、メーカーとしても製品開発やサポートに力を入れているように見受けられるのにたいして、こと核酸検出系に関しては、結構ユーザー軽視のしょぼいことをやってくれるんでねえ。 思えば、non-RIの核酸検出システム、完成度の低い製品を高い値段で出してはいつの間にか消滅というのを何度繰り返してきたことか（驚くことに最初期にはECLをそのまま転用したようなPO/ルミノール系で来た。当然のことながら他社の競合製品と比べて感度が桁違いに低かった）。 Nybondの組成が変わったときも同じブランド名なのにまるで性質の違うものに、いつの間にかこっそりと、変わっていたという印象がぬぐえません。組成が変わったことがあからさまになったのは、それまでやってきたプロトコールに従って使用したユーザーから、あまりのバックグランドの高さにたいする苦情が殺到してからというお粗末さ。

(無題) 削除/引用 No.922-4 - 2009/07/25 (土) 16:23:45 - たまご ＡＰさん、ありがとうございます。 やはりSSC等でのwashが一般的ですよね。 他にも水でwashしていらっしゃる方などいらっしゃいませんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.922-3 - 2009/07/25 (土) 12:44:54 - AP 最近のナイロンメンブレンなら短時間、固定前でもちょっと水洗いしたくらいではほとんど問題ないでしょう。固定前には2Xや20XのSSCなんか高塩濃度で洗うとするプロトコールのほうが一般的だとは思いますが。 baking前に洗うのは、ゲル片やその他の不純物で汚れたままだと、それらが焼きついて取れなくなってしまうからというのが主な理由です。また、アルカリブロットをした場合だと、高温化ではいかにアルカリに強いDNAやナイロンといえどもダメージを受けるので、十分に洗ってアルカリを除いてからbakingしないといけません（うっかり忘れると、DNAの分解のせいでしょう、非常に感度が下がります）。

(無題) 削除/引用 No.922-2 - 2009/07/25 (土) 12:44:42 - たまご ちなみにメンブレンはhybond-Nです。

サザンのblotting後の処理について 削除/引用 No.922-1 - 2009/07/25 (土) 12:30:47 - たまご サザンに関する質問です。 私は師匠に教わったプロトコルでサザンを行っているのですが、そのプロトコルに一つ腑に落ちない点があり、現在はその部分は行わずに操作を進めています。 それは何かというと、blotting後からbakingに移る前に一度メンブレンを水で軽くwashするというものです。 これってDNAが溶けだしちゃったりしないんでしょうか？現在、この操作なしで何の問題もありません。師匠とはもう連絡がつかないので、聞きようもありません。 素朴な疑問ですが、みなさんどう思われますか？

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