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(無題) 削除/引用 No.910-5 - 2009/07/23 (木) 13:55:25 - おお >[Re:4] Gさんは書きました : > 皆さんありがとうございます。 > 初めてゲルシフトをするときは、ウェスタンでまず有無を確認するのが当然ですか？ 100%とは言いませんが、やった方が断然いいです。 直接ゲルシフトをやって、スーパーシフトまでやれば 特異せいという意味である程度納得が行くデーターには なりますが、それより核抽出がうまくいっているのか とかいうのもありますし、ゲルシフトしてから 目的のバンドが得られず、後で不安になってウエスタン というのもどうかと思いますし、、、、 30ugはまあ妥当かなと思えます(システム、スケールが分からないので 細かいことはおいといてですが)。私はもう少し少なめ(半分ぐらいかな) で流すと思いますが。

(無題) 削除/引用 No.910-4 - 2009/07/23 (木) 13:26:33 - G 皆さんありがとうございます。 初めてゲルシフトをするときは、ウェスタンでまず有無を確認するのが当然ですか？ その場合、核タンパクはレーンに30マイクロg位ロードすればいいというかんじでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.910-3 - 2009/07/23 (木) 11:47:02 - う タンパク質の合成の仕方によっては、本来の生体内におけるタンパク質の立体構造を取れていない場合があり、 特異的に結合してシフトしてるっていうより、非特異的なものをダタ見てるだけってことも（合成したタンパク質が過剰量になっているとか） ＞みなさん核抽出物中にそもそも目的タンパクが含まれているかどうか、まず何かで確かめたりしますか？ ウエスタン

(無題) 削除/引用 No.910-2 - 2009/07/23 (木) 11:25:10 - おお >[Re:1] Gさんは書きました : > 合成した目的タンパクと、クルードな核抽出物を目的タンパクの検出を目標にゲルシフトした場合 (同じ目的タンパクに対するプローブで)、 > 同じタンパクであるのだから、全く同じ位置にシフトが観察されますか？ 目的のたんぱく質が細胞内でたのたんぱく質とコンプレックスを 作っていたり、修飾などで移動度に影響を与えている可能せいは ありますので、必ずとも同じ位置に来るとは限りません。 スーパーシフトなどで特異性をご確認ください。 > また、ゲルシフトをする場合、みなさん核抽出物中にそもそも目的タンパクが含まれているかどうか、まず何かで確かめたりしますか？ してください。

ゲルシフトについて 削除/引用 No.910-1 - 2009/07/23 (木) 10:37:32 - G 合成した目的タンパクと、クルードな核抽出物を目的タンパクの検出を目標にゲルシフトした場合 (同じ目的タンパクに対するプローブで)、 同じタンパクであるのだから、全く同じ位置にシフトが観察されますか？ 違う位置にシフトしているのですが… また、ゲルシフトをする場合、みなさん核抽出物中にそもそも目的タンパクが含まれているかどうか、まず何かで確かめたりしますか？ 宜しくお願いいたします。

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