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細胞培養ディッシュのリサイクル トピック削除
No.91-TOPIC - 2009/02/25 (水) 12:00:49 - 金がない
いつもお世話になっております。

貧乏ラボでお金が無くなってしまい、細胞培養のディッシュも買えない状態になってしまいました。

そこで、何とかディッシュをリサイクルできないかと考えているのですが、あまりうまくいかないという経験を持つ人もいました。

とりあえず、使用済みのディッシュを70%EtOHで消毒し、場合によってはゼラチンコートかコラーゲンコートを試してみようとは思っているのですが、何か良い方法をご存じの方はおられますでしょうか?


よろしくお願いいたします。
 
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No.91-17 - 2009/02/27 (金) 00:28:00 - TS
付着細胞用のDish(100, 60, 35mm,6 well, 12well)の再利用をしていました。
使用後、十分量の0.5%NaOHで1日おいて流水ー>D.D.W.で良く洗浄(コート面をこすらない)乾燥してパックしてエチレンオキサイドガス滅菌してました。
継代用などには問題なく使えていました。ただあまり小さいマルチwell(24以上)は洗い残しか生育がばらつきました。ただこの方法は、今はできないかも(エチレンオキサイドガス滅菌ができないかも)しれません。

あと、35mmDishが小さすぎてインキュベータ内で扱いにくいときは、使用済みの6wellのふたをひっくり返してトレイにするといいですよ。

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No.91-16 - 2009/02/26 (木) 17:38:32 - DSC
genjiさま
5000枚3000円ですか? バクテリア用にしても激安ですね。
よかったらメーカー・品番教えて頂けませんでしょうか?
ここに公開するのが憚られるならばメールでも結構です。
ぜひぜひお願い致します。

(無題) 削除/引用
No.91-15 - 2009/02/26 (木) 14:32:37 - つん
IWAKIの10cm dishを再利用したことがあります。
トリプシンで剥がした後、dishを培地かPBSでリンスし、遠心で回収した細胞を撒きなおしていました。
でも、継代時に予備として撒いていただけで再利用したdishの細胞を実験で使用したことはありません。
見た感じでは普通に育っていましたよ。

(無題) 削除/引用
No.91-14 - 2009/02/26 (木) 08:30:40 - qq
皆さんが継代に使用するdishのサイズは、幾らですか。
私は、インキュベータのスペースとコストの関係から、3cm-dishを使っています。
何匹の細胞を継代するのが、集団維持に有効かという問題が考えられますが、10cm-dishの1/10でも問題なかろうと考えています。
デメリットは、小さいdishだと、インキュベータ内でdishを倒してしまう可能性があることでしょう。

(無題) 削除/引用
No.91-13 - 2009/02/26 (木) 08:26:29 - genji
bacteria用のdishで思い出したのですが、5000枚(γ線滅菌済み)を3000円で私は購入しています(業界最安値だと思います)。
これを細胞培養用に使えたら費用が少なくてよいですね。
でも、私の場合、基本はディスポです。
血球計算版もディスポですよ。
ワンセルカウンターを使っていますが、多検体を測定するのに便利です。

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No.91-12 - 2009/02/25 (水) 22:32:52 - み
割り込みですみませんが、どのメーカーのディッシュを使いまわしていたか教えていただけないでしょうか、皆様?
当方は、IWAKIを主に用いていますので、使いまわせると・・・・と思うとかなりありがたい情報です。
よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.91-11 - 2009/02/25 (水) 21:25:59 - 名無し
クロスコンタミネーションすると大変なのでこれを避けるために、同じディッシュは同じ1種類の細胞のみで使い回しした方がいいですというかすべきです。

(無題) 削除/引用
No.91-10 - 2009/02/25 (水) 20:28:12 - ami
しっかりはがさないと変な強く接着してる細胞が残って変になります。そこは注意です。

(無題) 削除/引用
No.91-9 - 2009/02/25 (水) 20:06:26 - 金がない
皆様ありがとうございます。

意外と何もせずに使いまわしても問題ないことが多いようですね。

これで済めば一番楽ですので、一度試してみます。


どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.91-8 - 2009/02/25 (水) 20:02:43 - ami
普通はがして同じディッシュに巻いて特に問題なかたです。

(無題) 削除/引用
No.91-7 - 2009/02/25 (水) 16:16:28 - そこそこお金のあるラボ在籍者
細胞を教わった時から、フラスコやでディッシュは使い回すようにと教わりました…

今、使い捨てということを知ってびっくりしています。

これまで浮遊細胞はもちろん、HeLa, HEK293T, CHO, L cell, 初代培養血管内皮etc...

すべて使い回ししていました。

継代時にtrypsinizationして細胞を剥がし、継代用に希釈した細胞を同じdishやフラスコに戻していましたが6年間ほどこのやり方でやってますが、(比較してはいないですが)特に問題になったことは一度たりともありません。

個人的には使い捨ては勿体ないので絶対にしません。

(無題) 削除/引用
No.91-6 - 2009/02/25 (水) 15:41:02 - Tissue culture cell
継代しようと培養の作業を始めてから、ディッシュが全然足りないことに気づき、しょうがないのでトリプシン処理で細胞はがしたあとのそのディッシュに希釈した細胞をふたたび撒いて使ったことはあります。細胞は普通に増えて特にどうということはなかったです。

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No.91-5 - 2009/02/25 (水) 12:39:24 - 貧乏ラボ出身者
ディッシュの再利用法ではないのですが、私が似たような事情に遭った時には、再利用に起因する実験トラブルが嫌だったので、再利用に使う時間とエネルギーに相当する程度の短期のアルバイトをして、その収入を研究費に使っていました。大学だと正式には個人として自分のラボに寄附をした上でそこから使うという形になるのだと思います。

(無題) 削除/引用
No.91-4 - 2009/02/25 (水) 12:36:48 - ~
Nunc社の細胞培養用プレート(コート無し)を1回だけリサイクルしていました。

1.培養後は速やかにハイター(キッチンハイターではない)入りの水に漬けておく
2.水道水とスポンジで洗う(洗剤は付けない)
3.たしか、イオン交換水ですすぎました
4.乾燥機で乾燥
5.30分くらい安全キャビネット中でUVを当てる

で使っていました。複数回のリサイクルは試していないので分かりません。

特にコンタミや、貼りつきの悪さは見られませんでしたが、細胞によるのかもしれません。
抗生物質はカナマイシンを使っていました。

ポイントは、
表面に傷や塩などの析出を起こさない
洗剤などを残さない
滅菌する
だと思います。

(無題) 削除/引用
No.91-3 - 2009/02/25 (水) 12:33:35 - 金がない
残念ながら、細胞はHEK293で付着細胞です。

どうもリサイクルすると接着がうまくいかなくなるという話を聞いております。

(無題) 削除/引用
No.91-2 - 2009/02/25 (水) 12:22:31 - よっしー
浮遊細胞であれば,経代後も同じディッシュを使い続けてる人を見たことがあります(細胞を間引いて培地を加えるだけ).
もしくは,バクテリア用の安いやつを使うとか(これはリサイクルじゃないですね).

細胞培養ディッシュのリサイクル 削除/引用
No.91-1 - 2009/02/25 (水) 12:00:49 - 金がない
いつもお世話になっております。

貧乏ラボでお金が無くなってしまい、細胞培養のディッシュも買えない状態になってしまいました。

そこで、何とかディッシュをリサイクルできないかと考えているのですが、あまりうまくいかないという経験を持つ人もいました。

とりあえず、使用済みのディッシュを70%EtOHで消毒し、場合によってはゼラチンコートかコラーゲンコートを試してみようとは思っているのですが、何か良い方法をご存じの方はおられますでしょうか?


よろしくお願いいたします。

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