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(無題) 削除/引用 No.875-8 - 2009/07/17 (金) 11:54:13 - 経験者 ニ価さん 通常IgGのKdを算出する際には抗原結合部位が二カ所なので、bivalent model式で算出しなければなりません。

(無題) 削除/引用 No.875-7 - 2009/07/17 (金) 10:02:49 - あいうえお ミカエリスメンテンの式にフィットですか？ ヒルの式にフィットしたほうがよくフィットしそうな 気がしますが。 Kdをだすときには、通常プラトーの半分がどうとかは しないで、非直線回帰をしますよ。

(無題) 削除/引用 No.875-6 - 2009/07/17 (金) 09:53:47 - 二価 恥ずかしながら私も抗体のKdについてよく理解できていまません。抗体って結合部位が二ヶ所あるのですが、固相化抗原への結合の時、これは勘案されなくていいのでしょうか？ BIAcoreで抗体をコート、リガンドの濃度を換えてロードというのはまだわかった気になるのですが・・・

(無題) 削除/引用 No.875-5 - 2009/07/17 (金) 09:15:51 - qq お節介でしょうが、質問者の言っているとおりに、Ligand(free)にLigand（Bound）をプロットすれば、Kdが出るわけですが、 Ligand(free)をどうやって推定するか、もしくは、固相化receptor量をどうやって推定するかが、本当の大問題ではないでしょうか？ そうしないと、high-affinityの結合では、単に滴定曲線になってしまいますよね。ちがう？

判りました。 削除/引用 No.875-4 - 2009/07/17 (金) 00:57:21 - カイ お返事ありがとうございます。 ミカエリス定数がVmax/2の値になることは知っていたんですが、 そうか、コートした抗原と1次抗体の間のことだけ考えていたから 判らなかったんですね。 2次抗体まで含めて考えれば簡単でした。。 ヒントをありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.875-2 - 2009/07/16 (木) 23:43:20 - 経験者 >ELISA法を用いて抗体の解離定数Kdを出す方法を、 ・　一次抗体濃度を振り、吸光度を濃度に対してプロットする ・　プラトーに達する吸光度を1/2したところの抗体濃度がKdになる これを先日、教えたのは私です。 反応速度論を勉強中なんですよね？ こんな一般常識的なものも知らずにトピを立てるわけですか。。 ミカエリスメンテン式も知らないのに勉強中とは。。

ELISAでKd値が求まる理由 削除/引用 No.875-1 - 2009/07/16 (木) 22:09:27 - カイ 初めて質問させて頂きます。 反応速度論を勉強中の学生です。 ELISA法を用いて抗体の解離定数Kdを出す方法を、 ・　一次抗体濃度を振り、吸光度を濃度に対してプロットする ・　プラトーに達する吸光度を1/2したところの抗体濃度がKdになる 以上のように聞いたのですが、原理が判りません。 定義 Kd = [Ab(free)][Ag(free)]/[AbAg] をいじくれば出てくるかと思ったのですが、 実験条件として判っているのは[Ab(free)] + [AbAg]の値だけですし・・・ どなたかご教授頂ければ幸いです。

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