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訂正 削除/引用 No.868-3 - 2009/07/16 (木) 22:01:17 - 匿名 勘違いしておりました。 ライブラリーは動物細胞用のプロモーターを持ったベクターにあります。

(無題) 削除/引用 No.868-2 - 2009/07/16 (木) 10:37:29 - 通りがかり 大腸菌用のベクターなんですよね？ 膜蛋白の場合、そのまま大腸菌で発現させても不溶化するだけで意味のある蛋白はできないでしょうから、あまり使い道はないかも。 もしそのベクターに T3, T7, SP6 といったプロモーターが付いていれば、in vitro transcription で mRNA を合成し、Xenopus Oocyte に注入して発現させることはできます。セカンドメッセンジャーなどがある程度分かっていてアッセイ系が組めるなら、発現クローニングは可能です。論文も沢山あります。 しかしまずは哺乳類細胞用の発現ベクターでライブラリを構築して、Aに対する結合能でスクリーニングするのが常道でしょうね。

ｃDNAライブラリーを用いたレセプタータンパクのスクリーニング 削除/引用 No.868-1 - 2009/07/15 (水) 22:51:57 - 匿名 哺乳類のある特定の分化細胞において、リガンドＡ分子を作用させるとレセプターＸ分子がシグナル伝達を起こしてＢ分子を分泌するという現象を抑え、Ｘ分子を特定したいとします。 特定の分化細胞のcDNAライブラリー(大腸菌発現用プラスミドでの)を利用してＸ分子を特定(ＡとＢはわかっています。Ａタンパクは培養細胞で発現可能です。Ｂについては抗体などあります。)するには、どのようなmethodを組むのが得策でしょうか？ また、同じようなケースでうまくmethodを組んでいる論文など御存じであれば教えてください。

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