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細胞継代培養(謎の現象?) トピック削除
No.856-TOPIC - 2009/07/13 (月) 16:03:13 - たろう
ものすごく希少な現象なのかもしれないのですが、
neuro2aを培養していて、継代をするためにトリプシンで細胞を剥がして遠心をかけたところ、細胞の塊が透明なジェル状の物質に包まれた状態になりました。
最初は、細胞が死んでしまってゲノムが流出したのかと思ったのですが、顕微鏡でみてみると、細胞の形はきちんと残っていました。
neuro2aの特性かと思ったのですが、他の種類の細胞を継代している人にも同じような現象が起こりました。
今のところ、考えられるのはトリプシンの効果が弱くなって、細胞の接着性が残っているためだと仮説をたてています。
ジェル状の物質を避けて細胞を使えば問題はないようなのですが、気持ち悪いので本当の原因が知りたいと思っています。

よろしくお願いします。
 
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(無題) 解決済み 削除/引用
No.856-4 - 2009/07/14 (火) 12:15:48 - たろう
ちゃんと、FBSが入った培地で中和してから遠心したんですけどね。。。
ある企業の質問コーナーに質問してみたら、
トリプシンの効かせすぎかも。という意見でした。
よく考えると、細胞の状態があまりよくない時に継代をしたんでした。
いつも通りのトリプシンの効かせ方(37℃1min)だと、細胞にとっては過酷だったのかもしれないです。

お二人ともご意見ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.856-3 - 2009/07/13 (月) 18:11:33 - 経験者
>neuro2aを培養していて、継代をするためにトリプシンで細胞を剥がして遠心をかけたところ、細胞の塊が透明なジェル状の物質に包まれた状態になりました。


トリプシンの中和しなんだらそりゃDNA出てくるわ…

ちゃんと(トリプシンインヒビターの入ってる)血清で中和しなさいね。

(無題) 削除/引用
No.856-2 - 2009/07/13 (月) 16:46:15 - 中年
ごく一部の細胞が溶解してゲノムが出てきているのだと思います。

細胞継代培養(謎の現象?) 削除/引用
No.856-1 - 2009/07/13 (月) 16:03:13 - たろう
ものすごく希少な現象なのかもしれないのですが、
neuro2aを培養していて、継代をするためにトリプシンで細胞を剥がして遠心をかけたところ、細胞の塊が透明なジェル状の物質に包まれた状態になりました。
最初は、細胞が死んでしまってゲノムが流出したのかと思ったのですが、顕微鏡でみてみると、細胞の形はきちんと残っていました。
neuro2aの特性かと思ったのですが、他の種類の細胞を継代している人にも同じような現象が起こりました。
今のところ、考えられるのはトリプシンの効果が弱くなって、細胞の接着性が残っているためだと仮説をたてています。
ジェル状の物質を避けて細胞を使えば問題はないようなのですが、気持ち悪いので本当の原因が知りたいと思っています。

よろしくお願いします。

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