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Creマウスのプロモーター トピック削除
No.835-TOPIC - 2009/07/09 (木) 20:28:03 - jazzmessenger
組織特異的KO用のCreマウスを作ることになりました。そこで質問が2つあります。

1.　プロモーターはどの種のものを使用するのが最適か。マウスだからマウスのプロモーターがよいと思いますが、ヒトのプロモーターを使用する論文も見ます。使い分けなどあるのでしょうか。

2.　スタートコドンの前に、イントロンを置くとCreの発現がよいというのをよく見かけます。最初のエクソン以降で翻訳が始まる遺伝子では可能ですが、最初の遺伝子にスタートコドンがある場合、どのようなイントロンを入れればよいのでしょうか。

マウス作成の経験のある方、よろしくお願いいたします。
　
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(無題) 削除/引用
No.835-5 - 2009/07/11 (土) 13:34:29 - fsih
同種のpromoterを利用して、in vitroで活性を確認後、
Tg作製し、ターゲットの組織で特異的な発現を見れました。

しかし、その発現は、recombinationに十分な発現ではありませんでした。

もう一度作るとすれば、先述されていますが、ノックインにします。
heteroでも構いませんし、IRESいれてもどちらでもいいと思います。

参考までに

http:// 削除/引用
No.835-4 - 2009/07/11 (土) 05:16:46 - TK-1
>[Re:3] jazzmessengerさんは書きました :
> TK-1様
>
> レスありがとうございます。1つ目は質問の仕方が悪かったかもしれません。ヒト、マウス、ラット等のプロモーターがある場合、どれを使うのが最適かという質問でした。
個人的には発現の特異性が取れればどれでもいいと思っています。

> Knock-inでやるというのは、考えていませんでした。Knock-inで作ると、やはりKnock-inされた遺伝子はKnock-outになってしまうんですよね。私の勘違いでしょうか。
3'UTRにiresを使って入れれば、endogenousの発現は維持できますし、heteroでphenotypeが出ないのであれば、knock-outになっても気にしません。


> 教えていただいたカセットについて調べてみます。ご丁寧にコメントいただき、非常に感謝しております。
カセットというか、hGHやb-globinなどは頻繁に使われるので、市販のexpression vectorにはいっていたり、どこかからもらってPCRでとってしまうことも可能だと思います。

(無題) 削除/引用
No.835-3 - 2009/07/11 (土) 01:01:15 - jazzmessenger
TK-1様

レスありがとうございます。1つ目は質問の仕方が悪かったかもしれません。ヒト、マウス、ラット等のプロモーターがある場合、どれを使うのが最適かという質問でした。

Knock-inでやるというのは、考えていませんでした。Knock-inで作ると、やはりKnock-inされた遺伝子はKnock-outになってしまうんですよね。私の勘違いでしょうか。

教えていただいたカセットについて調べてみます。ご丁寧にコメントいただき、非常に感謝しております。

http:// 削除/引用
No.835-2 - 2009/07/09 (木) 20:59:25 - TK-1
>[Re:1] jazzmessengerさんは書きました :
> 組織特異的KO用のCreマウスを作ることになりました。そこで質問が2つあります。
>
> 1.　プロモーターはどの種のものを使用するのが最適か。マウスだからマウスのプロモーターがよいと思いますが、ヒトのプロモーターを使用する論文も見ます。使い分けなどあるのでしょうか。
発現が特異的で、なおかつ自分がみたい組織や、細胞の早い分化段階で出ていなければいいと思います。ただし、新しく作るのであれば私ならknock-inでやります。



> 2.　スタートコドンの前に、イントロンを置くとCreの発現がよいというのをよく見かけます。最初のエクソン以降で翻訳が始まる遺伝子では可能ですが、最初の遺伝子にスタートコドンがある場合、どのようなイントロンを入れればよいのでしょうか。
>
> マウス作成の経験のある方、よろしくお願いいたします。
stopとpolyAの間にartificialなsplicingサイト入れればいいです。rabbit beta globinやhuman GHなどがよく使われるsplicing casetteです。intronと発現レベルについては1985年頃のBrinsterのPNASに記されています。

Creマウスのプロモーター 削除/引用
No.835-1 - 2009/07/09 (木) 20:28:03 - jazzmessenger
組織特異的KO用のCreマウスを作ることになりました。そこで質問が2つあります。

1.　プロモーターはどの種のものを使用するのが最適か。マウスだからマウスのプロモーターがよいと思いますが、ヒトのプロモーターを使用する論文も見ます。使い分けなどあるのでしょうか。

2.　スタートコドンの前に、イントロンを置くとCreの発現がよいというのをよく見かけます。最初のエクソン以降で翻訳が始まる遺伝子では可能ですが、最初の遺伝子にスタートコドンがある場合、どのようなイントロンを入れればよいのでしょうか。

マウス作成の経験のある方、よろしくお願いいたします。
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