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みなさま、ありがとうございます 削除/引用 No.820-5 - 2009/07/08 (水) 09:37:21 - あおぞら ご経験ある皆さんよりのアドバイス、とても助かりました。ありがとうございます。基本的な方法に問題はなさそうなので、ほっとしたと同時に、それなりに扱いに注意が必要な細胞であることもわかり、ずいぶん気分も楽になりました。がん細胞のラインしかやったことがなかったので、それに比べては、やはり気を配らなくてはいけないようですね。

(無題) 削除/引用 No.820-4 - 2009/07/08 (水) 09:17:02 - つん 以前にやったことがあります。 分化誘導後はとても剥がれやすく、培地交換などには大変気を遣いました。 この細胞は継代を続けるうちに分化もしにくくなりますし、何かとやっかいでしたねー。

(無題) 削除/引用 No.820-3 - 2009/07/07 (火) 15:02:28 - ピペド 剥がれやすいのは普通のことだと思います。 当方では培地交換の際も吸引機を使用せず、マニュアルで吸引しています。また分化刺激をかける際のコンフルエンシーがはがれ易さに関係があるような気がしています。まったく隙間の無いコンフルから2日間後と、若干隙間の残る状態から2日後では、後者のほうがはがれやすいような印象を持っています。

(無題) 削除/引用 No.820-2 - 2009/07/07 (火) 12:12:08 - み 記載されたプロトコールは問題ないと思います。 はがれ易いのは普通だとも思います（コンフルになってから長期維持しているわけですから）。 mediumは最低でも2日に1回交換ですね。 僕は全部液を吸い取って交換するのではなく、 古い液を少し残して足していました。 分化誘導開始時点から数えて6日後あたりが「分化度合い」「はりつき具合」からして一番扱い易かった記憶があります。 dishをpoly-L-lysineやコラーゲンなどでコートすると改善するかもしれませんが、それは経験ないです。

3T3-L1 削除/引用 No.820-1 - 2009/07/07 (火) 08:38:29 - あおぞら 3T3-L1の培養の初心者です。 分化誘導後に、よく細胞がはがれてくるのですが、何か問題があるのか、それとも3T3-L1の場合、あり得るのかどうかということについて、お聞きしたいです。 使用しているのは　ATCCの　3T3-L1です。 定石どおり、最初はDMEM(high-glucose) + 10% CS で始め、コンフルエントに達してから２日間まち、分化誘導をかけます　（DMEM+10% FBS + 10 ug/mlインスリン+0.5mM Mix+250nM DEX)　。３日間まち、その後は分化促進培地（インスリンのみ添加したもの）に変更し、２日ごとに培地交換します。 培地交換もできるだけ丁寧に、直接細胞にあたらないようにしていますが、３分の１ぐらいのwellで、分化誘導後細胞がはがれてきます。 培地交換の間隔が１日延びてしまったことがありますが、これでも具合がわるくなる細胞なのでしょうか？ どんなことでも構わないので、コメント、アドバイスいただけるとありがたいです。

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