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(無題) 削除/引用 No.815-7 - 2009/10/29 (木) 14:21:10 - 千 http://immuno.med.kobe-u.ac.jp/fat_frozen/fat_frozen.shtml パソコン音痴なので、リンクになってなくてすみません^^; いつも色々参考にしているサイトです。

(無題) 削除/引用 No.815-6 - 2009/10/29 (木) 06:22:28 - ああい もう解決してるかもしれませんが・・・ 未固定の脂肪組織を切るのは他の組織に比べて格段に難しいです。 僕も昔ちょっと挑戦しましたが、諦めました（苦笑） 固定すれば結構きれいに切れると思いますよ。

(無題) 削除/引用 No.815-5 - 2009/07/06 (月) 22:24:17 - CJ ふむ。そういう理由なら逆に、たぶん固定、砂糖水に一晩、ＯＣＴ、凍結、という方法のほうがよさそうですねえ。 凍るとＯＣＴや砂糖水は粘り腰な感じでよい感じに切れるのですが、普通の水や固定液などはざらっとしたことになり、もし組織にこれらの液が多く含まれていると、ＯＣＴはうまく切れるけど、組織がへぼい感じになる、ということになります。要するにＯＣＴ（や砂糖水）と水や組織は硬さが違うのが問題なのです。組織がよくＯＣＴになじんでいれば良く切れるはずです。

(無題) 削除/引用 No.815-4 - 2009/07/06 (月) 22:10:04 - fsih お世話になります。 固定をしない理由は、クライオスタットのテクニカルに質問した時に 1. 温度を下げること 2. 未固定で行うこと を推奨されたためです。 (組織間質液の固まり方と固定液の固まり方が異なるから 切りにくくなるらしいです) 組織の厚みは、2-3mm くらいだと思います。 5um-10umの切片作製を行っております。 何度か行って、温度を下げることで、一部きれるようになったのですが、 やはり組織の半分以上はロスし、回収できた部分もシワが入り、汚い感じです。 何かポイントがありましたらご教示頂けますと幸いです。

(無題) 削除/引用 No.815-3 - 2009/07/06 (月) 22:04:41 - CJ ピペドさんも懸念しているように、未固定だとうまく切れていても氷結晶ができていて顕微鏡像がひどいことになりがちです。が、その点はおいておいて、 -40℃だとちょっと硬すぎるかもしれません。切片がすだれ状になってませんか？もしそうなら、温度が低すぎるのが原因です。-20℃くらいまで上げることが可能なはずです。

(無題) 削除/引用 No.815-2 - 2009/07/06 (月) 21:34:44 - ピペド 固定できない理由があるのでしょうか？ また組織の厚さはどのくらいですか？

白色脂肪組織の凍結切片の作製 削除/引用 No.815-1 - 2009/07/06 (月) 14:35:27 - fsih お世話になります。 現在、マウス精巣上体脂肪組織の凍結切片の作製を試みてますが なかなかきれいな切片が作製できておりません。 マウスをsacrifice後、Epi WATを未固定、OCT compoundにてliqN2で凍結。 クライオスタットを-40℃　ナイフを-35℃に下げて薄きりを行ってます。 マウスの脂肪組織の凍結切片の作製経験のある方、 アドバイスなどあればよろしくお願いします。

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