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(無題) 削除/引用 No.798-6 - 2009/07/04 (土) 01:22:56 - ひつまぶし 皆様、早速の有益なご意見本当にありがとうございます。 やはり、detergentの影響はかなりあるのですね。 本論からは少しそれるかもしれませんが、免疫沈降の、これは、と思える、コツやチップスを教えていただけると助かります（本来は自分で努力して取得すべきものでしょうが、、）。

(無題) 削除/引用 No.798-5 - 2009/07/03 (金) 12:41:33 - C あくまで一般論ですが非イオン性界面活性剤や両イオン性界面活性剤はあまり抗体反応を妨害しないと聞きます。対してイオン性のものはあまり適さないと聞きます。でも結局は抗体あるいはそのエピトープ次第とおもいます。自分の経験では、SDS変性したあとでも希釈すればちゃんと免疫沈降できたものもあるし、Triton X添加でうまく行かなくなったものもありました。条件とか、反応時間とかかなりいい加減にやっても（どんな条件でも全然OKみたいな感じで）ちゃんと抗原を捕まえてくる抗体もあるし、いろいろ条件を変えて詳細に検討しても全くうまくいかない抗体もあるし、（でもWBでは問題なく働くのに）。いちどですが界面活性剤をかえたら免疫沈降が見違えるようにうまくいったことがありました。 条件検討は時間と労力を使うし、うまく行かないと時間的体力的な損失が大きいから、IPにつかう予定ならば論文とかでIPのデータが出ているもの選ぶか、もらうかしたほうが確実かとおもいます。またIPはモノクロでなくポリクロ、部分ペプチド抗原でなくてホールの蛋白質で免疫した抗体、を使うと成功率は上がるようにと思います。あと市販品でIPできますとあっても出来ないものあるし、なにも書いてなくてもできるやつもあります。

(無題) 削除/引用 No.798-4 - 2009/07/03 (金) 11:09:18 - おお >[Re:1] ひつまぶしさんは書きました : > 。免疫沈降や洗浄過程に用いるバッファー（例えばRIPA）のdetergentが原因で、免疫沈降が全くうまくいかなくなる可能性ってあるもんなんでしょうか？ あります。 >All or Non、の感じで結果が変わるものなのでしょうか？ご経験等お聞かせ頂ければ助かります。 All or Nonで変わることも多々あります。 RIPAは結構使えない抗体があるのではと思います。

(無題) 削除/引用 No.798-3 - 2009/07/03 (金) 10:42:16 - 中年 抗体に依ります。例えば、抗HAの12CA5はデオキシコール酸があると確かダメだったんじゃなかったかな？

(無題) 削除/引用 No.798-2 - 2009/07/03 (金) 10:08:44 - み 使用している抗体または対象の抗原によるでしょう。 しかし「本当にIPに使用できる抗体（証拠も無くデータシートに可能とか書いてるバカ抗体は除いて）」なら大抵、RIPAでも少しは沈降できると思いますが。 腕にもよるか・・・。 抗原がマイルドな条件で可溶化できるのなら抽出・IP・洗浄もその条件でやれば良いだけだと思います。それでも落ちないなら抗体が悪いか腕が悪いか抗原がボロボロに分解されているか。

免疫沈降のときのバッファー中のdetergent 削除/引用 No.798-1 - 2009/07/03 (金) 08:49:48 - ひつまぶし 免疫沈降後、WBを行っているのですがうまくいきません。免疫沈降や洗浄過程に用いるバッファー（例えばRIPA）のdetergentが原因で、免疫沈降が全くうまくいかなくなる可能性ってあるもんなんでしょうか？All or Non、の感じで結果が変わるものなのでしょうか？ご経験等お聞かせ頂ければ助かります。

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