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(無題) 削除/引用 No.785-8 - 2009/07/08 (水) 22:57:51 - さとみ I am soory for the late responding. Thank you for everybody giving the suggestions. I really apppreciate. Sorry for writing in English. Japanese input method suddenly does not work with web browser, I do not know why.

(無題) 削除/引用 No.785-7 - 2009/07/04 (土) 03:19:48 - おお 高分子のゲノムとかカラムに引っ掛ってしまわないかなぁ ともおもったりします。ずたずたに切れたDNAだけが回収できたり、、、 まRNAもそこそこ大きくても回収はできているような気がしますので、 10kぐらいのものは回収できるかもしれませんが、、、、 インビトロジェンがむかしサイトゾルのRNAをとるトライゾールもどき を売っていましたが(今売っているか分かりませんが)そういうのだったら 、核フラクションを回収できるのでゲノムはとれるかもしれません。 えっとミトコンドリアとかようりょく体のDNAじゃないですよね、、、、

勝手な妄想ですが 削除/引用 No.785-6 - 2009/07/03 (金) 21:52:34 - パンタ 逆にDNA回収カラムからRNAは取れないですかね？DNeasyなんかの場合だと、最初にRNase処理しますよね？これをしないと、カラムには多量のRNAが、、、なんてことはないんでしょうか？同じシリカゲルメンブレンだし、、 ちなみにRNeasyの方はDNAは通り抜けると書いてありますが、DNeasyの方にはRNAは通り抜けるとは明記されていないようです（書かれていたらすみません。。） 実際やったことも聞いたこともないのですが、どなたかご存知ありませんか？

(無題) 削除/引用 No.785-5 - 2009/07/03 (金) 10:40:32 - Pumpkin >植物組織を粉砕したバッファー中のDNAは絡むに吸着されるのでしょうか いや、添付文書の内容であれば、DNA及びタンパクはカラムをスルーするようです。しっかりと内容を読まれましたか？kitなので単純比較できませんが、前述したAllPrep DNA/RNA Micro Kit(QIAGEN)はDNA精製カラムでDNAをカラムにトラップし、フロースローをRNA精製カラムでトラップするようです。Ambionにはこれと似たようなキットはなく、total nucleic acidからDNaseもしくはRNaseを用いて、DNA及びRNAを選択する仕様になっています。 >それとも下に流れ落ちるのでしょうか。 まずは、フロースルーをエタ沈、もしくはDNA精製用のカラムにかけられてはどうですか？ただ、グアニジン系の溶液でしょうから、それがカラムにバインディングすることを確かめなければなりませんが。エタ沈してからカラム精製用のバインディングバッファーに溶解しなおした方が得策かもしれません。

詳しい説明（あと出しごめん） 削除/引用 No.785-4 - 2009/07/03 (金) 01:05:45 - さとみ ありがとうございます。 　あとだし情報で申し訳ありませんが、100ug程度の植物組織からのRNA, DNA抽出を検討しており、Ambioの<1mg用のキット(RNAqueous)で試しています。原理はQiagenなどカラムと同じと思いますが、植物組織を粉砕したバッファー中のDNAは絡むに吸着されるのでしょうか。それとも下に流れ落ちるのでしょうか。 　使える組織が少ない事と、200以上のサンプルを処理したいために、このキットにしました。他のキットは少量サンプルに不向きと思いますので、このままこれで検討を進めたいのが第一の希望で、カラムの一般的な性質が知りたいのです。 　もちろん根本的に他の方法を提案してくださってもうれしいです。 　目的のDNA-PCRは半量以下(~50ng)のサンプルをCTAB法で抽出するだけで、うまく行く事がわかっています。少量サンプルの場合、CTABとキットとどちらがRNAの回収効率が良いでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.785-3 - 2009/07/02 (木) 22:36:20 - zuum カラムでなくてもいいのなら、 ニッポンジーンから、DNA, RNA, Protein を精製するキットが あったように記憶してますが。 いまでもあるのかな？

(無題) 削除/引用 No.785-2 - 2009/07/02 (木) 11:19:05 - Pumpkin こういうものがありますが。 AllPrep DNA/RNA Micro Kit(QIAGEN) カラムでなくても良ければ、Toatal Nucleic Acid Isolation System(Ambion)でRNAとDNAを同一出発材料・同一プレップで抽出できます。ただし、DNA精製にはRNase処理してDNAだけとる、RNA精製にはDNase処理するといった煩雑さはあります。

カラムでRNAとDNAを同時に抽出 削除/引用 No.785-1 - 2009/07/02 (木) 01:20:33 - さとみ 市販のRNA抽出用のカラムを使ってRNAとDNAを同時に抽出したいと思います。RNAはRT-RCP、DNAはPCRに使います。抽出の途中でDNAを含む溶液を得たいのですが、どの段階の液中に多くのDNAが存在していると考えられるでしょうか。または、DNAは最後までカラム上に残っているのでしょうか。 　ご存知の方、教えてください。

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