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DNAポリメラーゼによる伸長反応について トピック削除
No.781-TOPIC - 2009/07/01 (水) 22:33:00 - taq
こんにちは。
DNAポリメラーゼがDNAを合成する際に、DNAポリメラーゼは鋳型やプライマーがDNAなのかRNAなのか、基質がdNTPなのかNTPなのかということを厳密に識別しているのか疑問に思っています。具体的に表現すると

@DNAを鋳型としてプライマーにRNA(つまりdNTPではなくNTPを連結したもの)を使用してもDNAポリメラーゼで伸長できるのか?
ADNAを鋳型とし、DNAのプライマーとDNAポリメラーゼとdNTPではなくNTPで伸長反応を行った場合、RNAが合成されるのか?
BDNAのプライマーとdNTPの基質を使用し、RNAを鋳型にしてDNAを伸長できるか?
CDNAを伸長する際に、基質としてdNTPと少量のNTPを使用した場合、ある一定の割合でNTPが取り込まれたDNAが合成されるのか?

ということです。教科書には書いていないと思うのですが、in vitroでこういう現象は起こりうるのでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.781-3 - 2009/07/02 (木) 23:53:21 - taq
なるほど。逆転写酵素のことを失念していました。
(2)と(4)については暇なときに自分で実験してみようと思います。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.781-2 - 2009/07/01 (水) 23:05:08 - AP
DNA polといっても種類がたくさんあって、すべてを把握しているわけではないし、教科書レベルの知識で例出できて説明できることだけ

>@DNAを鋳型としてプライマーにRNA(つまりdNTPではなくNTPを連結したもの)を使用してもDNAポリメラーゼで伸長できるのか?

できます。生体内で複製はRNAプライマーからDNA合成が始まります(DNA pol IIIクラスだったっけ?)。cDNA合成で2nd strand合成は、1st strandを鋳型にして、RNase Hでnickを入れた鋳型RNAをプライマーに、nickからpol Iで伸長します。

>DNAのプライマーとdNTPの基質を使用し、RNAを鋳型にしてDNAを伸長できるか?

reverse transcriptaseの活性がまさにそうですね。DNA polとして第一に認知された酵素でもreverse transcriptaseの活性を合わせもったものが少なくないです(Tthなど)。


(2)と(4)は、説得力のある根拠を挙げられませんが、おそらくnegativeです。

DNAポリメラーゼによる伸長反応について 削除/引用
No.781-1 - 2009/07/01 (水) 22:33:00 - taq
こんにちは。
DNAポリメラーゼがDNAを合成する際に、DNAポリメラーゼは鋳型やプライマーがDNAなのかRNAなのか、基質がdNTPなのかNTPなのかということを厳密に識別しているのか疑問に思っています。具体的に表現すると

@DNAを鋳型としてプライマーにRNA(つまりdNTPではなくNTPを連結したもの)を使用してもDNAポリメラーゼで伸長できるのか?
ADNAを鋳型とし、DNAのプライマーとDNAポリメラーゼとdNTPではなくNTPで伸長反応を行った場合、RNAが合成されるのか?
BDNAのプライマーとdNTPの基質を使用し、RNAを鋳型にしてDNAを伸長できるか?
CDNAを伸長する際に、基質としてdNTPと少量のNTPを使用した場合、ある一定の割合でNTPが取り込まれたDNAが合成されるのか?

ということです。教科書には書いていないと思うのですが、in vitroでこういう現象は起こりうるのでしょうか?

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