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(無題) 削除/引用 No.754-8 - 2009/06/29 (月) 21:33:09 - CJ 参考までに ＤＡＢとの対比に赤系の対比染色は禁忌です。 Ni-DABとの対比に青系の対比染色も禁忌です。 組織さんのおっしゃるようにＤＡＢとヘマトキシリンの組み合わせは悪くありません。明視野染色は光の透過性をいじるものなので、濃く染まったらよく判らなくなるのは技術的に仕方のないことです。明視野染色で全体的な傾向を把握したら蛍光染色で確認するのが良いでしょうね。（私は常に両方やるようにしています）

(無題) 削除/引用 No.754-7 - 2009/06/28 (日) 12:02:37 - 組織 > ＤＡＢにより細胞が全体的にそまってしまい、核の青色がみえにくい これが特異的なシグナルであることを確認されているなら、核染色にあまりこだわらなくてもいいような気もします。染まっている部分の分布や局在から一定の細胞（群）にシグナルがあることがわかるのであれば、核染色は必ずしも必要というわけではないように思います。実際凍結切片ではDAB発色して核染色してない論文をちょくちょく見かけますね。 それはそれとして抗体濃度を振って確認実験はやっておいたほうがいいかもしれませんね。免疫染色では対照スライド（特に陰性対照）の解釈が難しいときもありますから。抗体濃度を下げれば思わぬバックが消えることもありますし、DABで過染している部分が減ればヘマトキシリンもしっかり染まってくるかと思います。

(無題) 削除/引用 No.754-6 - 2009/06/28 (日) 07:39:13 - 初心者 おっしゃるとおり、免疫染色でよく使われている対比染色なので、うまく対比できれば今まで通りこの２つでいきたいのですが。ＤＡＢにより細胞が全体的にそまってしまい、核の青色がみえにくいのです。コントロールのスライドでは核がきれいに染まっています。ヘマトキシリンの濃度を変えてみる、抗体の濃度をかえてみる、色を変えてみるなど試してみたいと思います。有難うございました。

(無題) 削除/引用 No.754-5 - 2009/06/27 (土) 18:24:03 - 組織 DABとヘマトキシリンって十分区別できる組み合わせだと思うんですが。。免疫染色では一番良く使われている対比染色ですし。まずは問題がヘマトキシリン染色にあるのか、免疫染色にあるのかをはっきりさせた方がいいんじゃないでしょうか。 例えば、 ・そもそもDABのシグナルが弱く、対比染色するとさらに判別しづらい ・ヘマトキシリンを過染色して、DABのシグナルをマスクしている ・ヘマトキシリンの色調がおかしい ・抗原が核内にあるため、核染色をするとシグナルを判別しづらい 具体的にはどういった症状でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.754-4 - 2009/06/27 (土) 17:51:05 - よっしー カラッチの酢酸加ヘマトキシリンの2倍希釈使ってます． 薄めで気に入ってます．

DAB-ニッケルもあります 削除/引用 No.754-3 - 2009/06/27 (土) 16:22:48 - snow DAB-ニッケルでDAB感度を増感させることもできます。これなら茶色ではなく、黒く染まりますよ。ヘマトキシリンで対比染色した色と区別しやすいです。

他の対比染色ではだめですか？ 削除/引用 No.754-2 - 2009/06/27 (土) 16:19:01 - snow ヘマトキシリン以外に、メチルグリーンで緑に、もしくはヌクレアファストレッドで赤っぽく対比染色する方法がありますよ。区別がつきにくいのであれば、試してみるといいですよ。いかがでしょう？

カウンターステイン 削除/引用 No.754-1 - 2009/06/27 (土) 12:28:02 - 初心者 いつもお世話になります。 免疫染色の件でまた質問させてください。 DABの茶色とヘマトキシリンの青の区別がつきにくいのですが、どのようにしたらはっきりさせることができるでしょうか？ヘマトキシリンは、Gillのｘ３に１０秒つけています。その後、流水で２分間洗っています。ヘマトキシリンを希釈してみようと思うのですが、どの程度希釈したら良いでしょうか？ ご指導よろしくお願い致します。

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