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細胞に対するスクレイパーの影響
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No.738-TOPIC - 2009/06/24 (水) 20:18:18 - **
細胞を回収するときにスクレイパーを使用しますが、この時どれぐらい細胞に影響を及ぼすのでしょうか?まだ慣れないせいかごりごり剥がしているのですが、それが心配で。
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No.738-2 - 2009/06/25 (木) 13:27:38 -
あべちゃん
細胞をはがす際に、細胞膜が破れたりすると、「プロテアーゼの暴走」が始まり、どんどん細胞内蛋白質を分解してしまうと言われています。なので、**さんの言うようにゴリゴリ剥がすと細胞が破壊されて、蛋白質の分解が始まってしまいます。
かき取る際はなるべく、一筆書きのように、ささっとスクレーパーを滑らし、消しゴムのかすのようなものをディッシュの1カ所に集めるようにするのが良いと思います。
それでも、内在性プロテアーゼの影響は無視できないなので、これを避けるために、細胞をはがす際、いろいろな方法がとられます。
プロテアーゼ阻害剤を入れる。
低温で処理する。
SDSサンプルバッファーなど変性剤入り溶液を加える。
等です。
細胞のかき取りに関してGEのHPにこんな情報があります。
http://www.gelifesciences.co.jp/technologies/ettan_dige/dojo03_03.asp
http://www.gelifesciences.co.jp/technologies/protein_preparation/lysis.asp
細胞に対するスクレイパーの影響
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No.738-1 - 2009/06/24 (水) 20:18:18 - **
細胞を回収するときにスクレイパーを使用しますが、この時どれぐらい細胞に影響を及ぼすのでしょうか?まだ慣れないせいかごりごり剥がしているのですが、それが心配で。
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