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beta amyloid抗体について トピック削除
No.735-TOPIC - 2009/06/24 (水) 10:51:16 - えーべーた
神経分野は素人なので、教えていただきたいのですが、beta amyloid抗体はamyloid precursor proteinを認識することができるのでしょうか？
というのも、先日、シグマ社の抗beta amyloid抗体を用いてあるサンプル（アルツハイマー関連のものではありません）でウェスタンブロットを行ったところ、約150kDa、約60kDa、約40kDaのバンドが得られました。特に約150kDaのバンドが濃くでました。
サイズから考えると、beta amyloid とは考えることは難しいと思われます。
ご存知の方がいらっしゃいましたらご返答ください。
　
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No.735-6 - 2009/06/25 (木) 10:05:49 - えーべーた
ご返答ありがとうございます。

Google scholarでは調べてはいたのですが、なかなか高分子量のバンドまで乗せている文献は見当たりませんでした。

分解物や、多量体などの影響なんだと思いますが、文献ごとに分子量が異なるのが気になります。

abetaをみる抗体とAPPをみる抗体とで使い分けをしている文献が多いのを見ると、やはり他の抗体で検討するのが必要だと感じます。

ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.735-5 - 2009/06/24 (水) 13:15:07 - C
Aβペプチドはもともとは前駆体APP（分子量は100KDa以上だったとおもいます）の一部なので、APPあるいはAβ部分を含むようなその部分分解物とも反応すると思います。またAβはアミロイドを形成することからもわかるように、しばしば難溶性あるいはSDS抵抗性のオリゴマーを作りやすいので、SDS-PAGEしたときにモノマーの位置だけでなくより高分子量の位置に２、３、−−−量体とおもわれるバンドあるいはスメアーが現れることがあります。以上のことから、特異性さえ問題ないならば、高分子量領域にシグナルが出ること自体はおかしなことではないと思います。
Abetaは大変小さなペプチドなので、うまく転写されているかどうかは注意が必要とおもいます。低分子ペプチド用のPVDF膜をつかうとか必要ならば転写条件を検討するとかしたほうがいいかもしれません。

APPは神経特異的な蛋白質というわけではないし、神経細胞でなくてもAPPを作る培養細胞はあるので、それ自身はとくにおかしなことではないと思います。

(無題) 削除/引用
No.735-4 - 2009/06/24 (水) 12:57:24 - abeta
御存知かも知れませんが、APPは神経細胞以外の多くの細胞でも発現しています。その量は細胞種毎に違いますし、発現の割合が細胞種によって異なる幾つかのアイソフォームを持ちます（695、751、771aa、他にもあるようですが主に）。加えて、糖鎖修飾を受ける事によりSDS=PAGE上での移動度が変化します。
また今回お手持ちのサンプルでWBしたとの事ですが、もしAbetaが見れる事を期待して15-18%のゲルで泳動したのであれば高分子量領域の分子量は正確ではないと思われます。

以上の事から言える事は「150kDaのバンドはAPPの全長かもしれないし、そうじゃないかもしれない。」

お使いの抗体を使ってWBした論文ってありませんか？
google scholarで調べた限り幾つか論文があたるのですが、今ラボではないので具体的に論文が引けません。

すいません。結局何とも言えずに。

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No.735-3 - 2009/06/24 (水) 11:52:55 - えーべーた
すばやいご返答ありがとうございます。

抗体は、クローンBAM-10のマウスモノクローナル抗体です。

サンプルは、ちょっと書けませんがあるガン細胞株を用いています。

なので、実際にAPP、beta amyloidが存在するのか？などは不明です。

(無題) 削除/引用
No.735-2 - 2009/06/24 (水) 11:10:36 - abeta
ものによると思います。
私の手持ちのものは全長、betaCTF、Abeta及び抗原部位を含む他の分解産物を認識します。
つまり抗原部位がbetaとalphaの間ということですね。

最低限のAPP-Abetaの関係は大丈夫でしょうか？
つまり膜にどう埋まってて、どうやって切れるかとか。
（偉そうな事は私もいえませんが）

で、結局。抗体の情報が無いとなんとも。

加えてサンプルもお書きになった方が良いかと。

beta amyloid抗体について 削除/引用
No.735-1 - 2009/06/24 (水) 10:51:16 - えーべーた
神経分野は素人なので、教えていただきたいのですが、beta amyloid抗体はamyloid precursor proteinを認識することができるのでしょうか？
というのも、先日、シグマ社の抗beta amyloid抗体を用いてあるサンプル（アルツハイマー関連のものではありません）でウェスタンブロットを行ったところ、約150kDa、約60kDa、約40kDaのバンドが得られました。特に約150kDaのバンドが濃くでました。
サイズから考えると、beta amyloid とは考えることは難しいと思われます。
ご存知の方がいらっしゃいましたらご返答ください。
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