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FSC/SSCの細胞のプロットが変わります トピック削除
No.706-TOPIC - 2009/06/19 (金) 18:33:45 - FCM勉強中
初めて質問します。

牛の白血球を用いてフローサイトメトリーを行っています。

今まではFSC/SSCのプロットで
きれいにリンパ球、単球、顆粒球が見えていました。
きれいにというのは、細胞集団の分離が明瞭で
集団がある程度ちいさくまとまっている状態ですかね。

数日後に採材して同様の操作をおこなったところ、
細胞集団のSSCが高くなり、
横に伸びたような感じになりました。

このような現象に遭遇したかたはいらっしゃいませんか。
レスお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.706-4 - 2009/06/22 (月) 09:30:20 - FCM勉強中
> 経験者 様
メッセージどうもありがとうございます。

>FACSはやはりその日のCaliverのconditionで得られるシグナルは変わりやすい
とのことでしたが、
うちで使っているのは、Caliverでなく、
すっごい古いFACS Canなので、
余計にコンディションは悪いかもしれないです。

>日を改めて同じFSC/SSCにシグナルが現れなくてもSSCのvoltageを下げて前回と同じようなpopulationが再現できればOKじゃないでしょうか。

に関して質問なんですが、
以前、FACSのやり方を教えていただいた方には
試験期間中はVoltage等の全ての条件は一定にして測定し、
比較するのがよいと教わったのですが、
変えても良いものなのでしょうか?
お考えを聞かせていただけたらうれしいです。

>DC様
メッセージありがとうございます。

>免疫系が活性化していればFSCやSSCの値が大きくなっている

FSCやSSCの値が大きくなるというのは
そのような意味があったのですね。
勉強になります。

>もし血清が入手できるのであれば、考えられる病原菌に対する抗体価やサイトカイン量(ELISA系が充実しているかはわかりませんが)を測定してみるといいのではないでしょうか

サイトカインに関してはリアルタイムPCRをかけている途中です。
血清も保存してあるので、
ELISAも検討してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.706-3 - 2009/06/20 (土) 17:26:20 - 経験者
>数日後に採材して同様の操作をおこなったところ、
細胞集団のSSCが高くなり、
横に伸びたような感じになりました。

おそらく同じマウ…いや、牛からの採血したのでしょう。

FACSはやはりその日のCaliverのconditionで得られるシグナルは変わりやすいので、できるだけ同じ日に測定すべきです。

日を改めて同じFSC/SSCにシグナルが現れなくてもSSCのvoltageを下げて前回と同じようなpopulationが再現できればOKじゃないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.706-2 - 2009/06/19 (金) 20:29:32 - DC
ウシですと、近交系になっていないと思われますので、白血球の状態もウシごとに異なっている可能性があるのではないでしょうか

また、同じウシから得たサンプルであっても飼育環境次第では病原菌が感染して免疫系が活性化していればFSCやSSCの値が大きくなっている事が考えられます。
もし血清が入手できるのであれば、考えられる病原菌に対する抗体価やサイトカイン量(ELISA系が充実しているかはわかりませんが)を測定してみるといいのではないでしょうか。

FSC/SSCの細胞のプロットが変わります 削除/引用
No.706-1 - 2009/06/19 (金) 18:33:45 - FCM勉強中
初めて質問します。

牛の白血球を用いてフローサイトメトリーを行っています。

今まではFSC/SSCのプロットで
きれいにリンパ球、単球、顆粒球が見えていました。
きれいにというのは、細胞集団の分離が明瞭で
集団がある程度ちいさくまとまっている状態ですかね。

数日後に採材して同様の操作をおこなったところ、
細胞集団のSSCが高くなり、
横に伸びたような感じになりました。

このような現象に遭遇したかたはいらっしゃいませんか。
レスお願いします。

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