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(無題) 削除/引用 No.701-5 - 2009/06/20 (土) 21:12:33 - ami 最近にせものがいっぱい出て困ってますが、、（関係ない） 2mMくらいまでは、ちゃんとon iceとかしてれば大して問題ないです。2mMくらいならLysisしなくても詰まらずちゃんとできます。ちょっとAcquireに時間かかりますけど。

(無題) 削除/引用 No.701-4 - 2009/06/20 (土) 17:29:07 - 経験者 >この最初のステップのＴＥを０．５ｍＭ　ＥＤＴＡや、ＰＢＳプラス１０マイクロＭの　ＥＤＴＡ等に変えた方がよいのか、 逆に教えてください。 EDTAの濃度は500 uMと、10 uMとで随分違うような気がしますが、５００uMというのはtoxicityありませんか？ 教えてください。 amiさんでもいいので教えてください。

(無題) 削除/引用 No.701-3 - 2009/06/19 (金) 19:58:53 - ami 後眼窩静脈採血→尾静脈採血、あとはLysisしない ぁ同じ回答でしたすいません

(無題) 削除/引用 No.701-2 - 2009/06/19 (金) 14:40:37 - 経験者 単純にひ細胞でFACSは出来ない事情があるんですね。 トピの内容と関係ありませんが、がんてい採血は動物愛護の観点から問題ありますよ。 ヘパリンで凝固を抑えながら採血後、RBCも特に溶解せずFACSでやってもいいような気もしますが。 だってRBCとlymphocyteなんてFSC/SSCで区別できますしね。

ＨＬＡトランスジェニックマウスの確認 削除/引用 No.701-1 - 2009/06/19 (金) 11:34:48 - マウスリンパ球 ＨＬＡトランスジェニックマウスの確認です。後眼窩静脈から７５マイクロ採血し、それをＴＥ　５０マイクロと混ぜて、ＲＢＣライシスバッファー１０００マイクロと混ぜて常温１０分放置 （ＢＤのマニュアルでは１５分）し、遠心にてリンパ球表面のＨＬＡをＦＩＴＣレベルした抗体にて確認しています。質問は、リンパ球の生存率が低いため、この最初のステップのＴＥを０．５ｍＭ　ＥＤＴＡや、ＰＢＳプラス１０マイクロＭの　ＥＤＴＡ等に変えた方がよいのか、試行錯誤中ですが、どなたかベターな方法ありますでしょうか？

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