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イネ培養細胞中の全タンパク質のラベル化 トピック削除
No.68-TOPIC - 2009/02/21 (土) 23:35:30 - booooo
イネの培養細胞中の全タンパク質をアイソトープでラベルすることを計画しています。
35Sメチオニンを使おうと考えていますが、処理時間、処理濃度などご存じの方が折られましたら教えてください。
ラベルはCでは駄目でしょうか?手元にプロリンがあるのでそれが使えればそれを使いたいと思っています。
目的はラベルしたタンパク質からある目的のタンパク質を精製したいと考えています。目的タンパク質量が少ないのでラベルしたいと考えています。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.68-2 - 2009/02/24 (火) 20:41:50 - 名無し

preparative 2-DPAGEで精製でしょうか、それともカラムですか? 2-DPAGEなら細胞分画あるいは異なる界面活性剤で段階的に抽出するなどのenrichmentはやってみましたか。
カラム精製ならば、単に精製のために、なにもアイソトープでラベルまでしてやるのはどんなもんでしょうか。カラムワークとかRI室でやることになるのでしょうか。存在量が微量であっても、それなりの量の出発材料でスタートして、かつ回収率が極端に悪くなければ精製が進むにつれて電気泳動で、これかな?というかんじのそれっぽいバンドが見えてくると思うし、精製してもCBBでバンドみえないほどの回収率だと、その精製蛋白質を使ってそこから先に進むのは厳しいと思うのですが。

イネ培養細胞中の全タンパク質のラベル化 削除/引用
No.68-1 - 2009/02/21 (土) 23:35:30 - booooo
イネの培養細胞中の全タンパク質をアイソトープでラベルすることを計画しています。
35Sメチオニンを使おうと考えていますが、処理時間、処理濃度などご存じの方が折られましたら教えてください。
ラベルはCでは駄目でしょうか?手元にプロリンがあるのでそれが使えればそれを使いたいと思っています。
目的はラベルしたタンパク質からある目的のタンパク質を精製したいと考えています。目的タンパク質量が少ないのでラベルしたいと考えています。
よろしくお願いいたします。

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