２次抗体液中に沈殿が生じていませんか？
２次抗体を使う前に遠心して上清を使うと改善されるかもしれません。
また、キシレン処理中の白い水玉は、切片の脱水が不十分だと生じます。
切片は、新鮮な純エタノールに何回か通して完全に脱水することが大事です。
また、純エタノール中に水分が残存している可能性もあります。
モレキュラーシーブズでエタノールを処理するとよいでしょう。
> 免疫染色の件で教えてください。
> 凍結切片の免疫染色を行っていますが、染色後顕微鏡下でみてみると、ごみのようなものが多く
> 肝心なものがよく見れない状態です。ＤＡＢを使って発色させていますが、ごみも一緒に茶色に
> そまっており、非常に困ります。
> 凍結切片は乾燥後、ＰＢＳに５分、その後抗原賦活、過酸化水素水、ブロッキングで通常のス
>テップへ続き、ヘマトキシリン後、最後はエタノール、キシレンで封入しています。試薬が原因
>かとすべて新しくしましたが、だめでした。コントロール切片も、気持ち少ないようですが、拡
>大するとたくさん細かいものがあります。これは何が原因でしょうか？また、最後のキシレン中
>では何か白い丸い水玉様のものができるのですが、まだ水分かなにかが残っているのでしょう
>か？ご教示いただけますと助かります。どうぞよろしくお願い致します。 |
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