全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.644-2 - 2009/06/12 (金) 11:04:49 - DSC 1. 3'-（アクセプター）スプライスサイトからできるだけ遠くに（300 bp以上、できれば400bp以上上流に）挿入する方がいいと言われています。イントロンの最下流300 bpの範囲にbranch siteが存在する場合が多いからです（実際にはもっと狭い範囲だと思いますが）。実際私の場合、3'-siteの約200 bp上流にエレメントを挿入したら、そのアレルからの発現が低くなってしまったことがあります（スプライシングの効率に影響したためか）。5'-（ドナー）サイト直近に挿入するのもなんだか憚られますし、そう考えると400 bp以上の長さをもつイントロンでなければ、挿入するのは怖いです。 2. 遺伝子の方向性に対する長腕と短腕の向きは、一般的には気にしなくてよいと思います。

コンディショナルKOやKIのコンストラクト作製について 削除/引用 No.644-1 - 2009/06/12 (金) 10:24:58 - もあい 基本的な質問かもしれませんが、よろしくお願いします。 １．コンディショナルKOやKIのコンストラクトを作る際にloxp-Neoのカセットをイントロン部位に挿入すると思いますが、そのときの挿入部位などに関しての質問です。 コンディショナルKOではCreでdeleteしない状態では通常のスプライシングに影響がない場所、KIではカセットを落とした後にloxpが残ってもスプライシングに影響がない場所だと思われますが、挿入してもあまり影響がないイントロンの配列などあるのでしょうか？ それとも特にルールなどなく、入れやすい制限酵素サイトがあったところにいれるものなのでしょうか？ ＊ボスに聞いたら短いイントロンより、長いイントロンのほうが良いと聞きました。 あとはバイチャンスだと言われました。 ２．ホモロジーアームについてですが、スクリーニングのPCRため長腕（5Kb）と短腕（2Kb）を考えておりますが、長腕は5'が良い、3'には短腕が良いなど（または逆が良い）あるものでしょうか？ 基本的な質問で誠に申し訳ありませんが、ご享受よろしくお願いいたします。

全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

---