Bio Technical フォーラム

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経時的にFACSで陽性細胞の数を追うには トピック削除
No.638-TOPIC - 2009/06/10 (水) 15:51:58 - む
FACSを始めたばかりの初心者です。
現在CD14PC5、CD16FITCを染めてCD14＋＋CD16ーの単球をFACSariaで単離し37度インキュベーターで培養しています。
24時間おきにCD14、CD143ともに陽性の細胞を確認したいので、CD143PEを追加で染色しFACSに
流すということをしています。この場合、CD14の発現が時間がたってしまうため落ちてしまうということが起こるのでしょうか？起こる場合何か対策があればご教授いただければ幸いです。
　
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No.638-5 - 2009/06/11 (木) 20:50:29 - む
ami,human,DC様
貴重なご意見を頂き本当にありがとうございました。
その都度染めて一度実験をやってみます。

(無題) 削除/引用
No.638-4 - 2009/06/11 (木) 13:34:03 - DC
単純にCD14 (+)が単球もしくはMφであると考えるなら、ソーティング後24時間以上も培養していればソーティングい用いた抗体は取り込まれて分解されると考えるのが普通だと思います。Mφなどは、細胞外抗原を取り込み分解する事に特化した細胞とも言えますし、amiさんのおっしゃるようにFACSを取るTime-pointごとに抗体を染め直す方がいいのではないでしょうか。

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No.638-3 - 2009/06/11 (木) 13:15:56 - human
何で培養しているかにもよりますが、単球が活性化あるいはDCへ分化しCD14の発現が落ちているのではないでしょうか？

(無題) 削除/引用
No.638-2 - 2009/06/10 (水) 18:19:54 - ami
まくたんぱくもTurnoverあるので毎回染め直してはだめでしょうか。

経時的にFACSで陽性細胞の数を追うには 削除/引用
No.638-1 - 2009/06/10 (水) 15:51:58 - む
FACSを始めたばかりの初心者です。
現在CD14PC5、CD16FITCを染めてCD14＋＋CD16ーの単球をFACSariaで単離し37度インキュベーターで培養しています。
24時間おきにCD14、CD143ともに陽性の細胞を確認したいので、CD143PEを追加で染色しFACSに
流すということをしています。この場合、CD14の発現が時間がたってしまうため落ちてしまうということが起こるのでしょうか？起こる場合何か対策があればご教授いただければ幸いです。
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