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(無題) 削除/引用 No.633-4 - 2009/06/09 (火) 13:22:40 - おお １度抗原としてペプチドを合成する時にアドバイスをもらったことがあります。 合成したペプチドの末端にCysがくるようにする(N末でもC末でも)。 N末であればMetからCysがあるところまで合成するか、N末のエピトープ を考えている所にCysがないなら末端どちらかにCysを入れる。 C末はC末あたりでCysがあるところでスタートしてC末までのばす。 Cysが見当たらない時はどちらか末端に導入。 たしかにN末配列にはC末にCysを、C末配列にはN末にCysを 入れた方が末端を認識するような抗体ができる可能性が あるともいえますが、ポリクロを作る限りそういう 抗体を含んだミクスチャーになりますし。N末とかの 修飾の可能性とか考えると、N末の配列を使ったからといって Metで始まった方がよいというのは、一概にいいとは いえませんね。 目的のタンパクのペプチド配列の真ん中とか途中とかを 使いたい場合は、そのあたりのCysを選んでそこから始める かそこで終わるようにする。Cysが見当たらなければN、C どちらでもよいからCysをつける。 末端にCysを持ってくるようにして、CysでKLHにコンジュゲート し、Cysから抗原が外に突き出ているようなイメージだと思います。

(無題) 削除/引用 No.633-3 - 2009/06/09 (火) 11:49:14 - NC あ、すいません連投で。 最初のはKLH-peptideで、二回目のはpeptide-KLHでした。 思い出しました。 やっぱり、あると思いますよ、N末に着けるかC煮付けるかの違い。 結局、それが抗原として提示されなければ抗体ができないわけですから。 ただどこまでその予測ができるかですが。 （すいません、これに関しては情報がありません） ただ、目的と、蛋白質の性質にもよりますが 全長なり、部分配列のほうが、少なくともキャリアーの件を気にしなくてよくなる場合もありますよね。 例えばGST-fusionなりで発現させて、その後それを外すとか。 余り余計な事を言うと昨今あれなんで、一先ずこの辺りで。

(無題) 削除/引用 No.633-2 - 2009/06/09 (火) 11:32:37 - NC 参考までに ある蛋白質のpeptideに対する抗体をrabbitを用いて作ろうとしていた時、 当初二羽、その後二羽に対し、KLH-conjugatedのpeptideを免疫して抗体が得られず、 その抗原が切れてしまった事も有り、せっかくなんで？新しくKLHを逆に付けたpeptideを合成し、 （すいません、どっちがNだったか覚えていませんが、元々その抗原部位は比較的C末側です） ウサギ（これも二羽）に免疫し、それなりの力価の抗体を得た事が有ります（二羽ともに）。 結局、ウサギの差なのか、抗原の差なのか全くわかりませんが、参考になれば。

ペプチドへのKLH conjugationの位置 削除/引用 No.633-1 - 2009/06/09 (火) 07:17:30 - うさぎ ペプチド抗原を用いてウサギポリクローナル抗体を作る際、KLHなどのキャリアーをconjugationしますが、結合させる位置（N末、C末もしくは途中など）はどのように決めるのでしょうか？たとえば、ある蛋白質のC末端のペプチド配列を用いる場合には、やはりそのペプチドのN末側にconjugationをした方が良いということはあるのでしょうか？よろしくお願いいたします。

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