Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

トピック一覧　|　研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム　|　このフォーラム　|　ひとつ前のフォーラム（readのみ）

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

巨大たんぱく質　合成系 トピック削除
No.601-TOPIC - 2009/06/02 (火) 20:02:42 - In vivo, In vitro
In vivo, In vitroのたんぱく合成系で、巨大たんぱく質（200ｋｄ以上）に有利な大量合成システムがあれば教えてください。（局在は核か細胞質です）

いままでBaculoは試しましたが、うまくいっておりません。Baculoの修飾システムでも構いません。Baculoで大腸菌におけるように、低温で発現誘導を行ったらどうなるのでしょうか？

近くに紹介されている膜たんぱく質の合成系は非常にいいようで驚きました。
　
- このトピックにメッセージを投稿する -



全11件 ( 1 〜 11 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用
No.601-11 - 2009/06/05 (金) 20:51:16 - あべちゃん
>[Re:10] In vivo, In vitroさんは書きました :
> >あ、賛成。たしかに293Tでシャーレ1、2まいでやっていて、その10倍ぐらいであればできる範囲だと思いますね
>
> 目的、場合にもよるのですが、200枚くらいになるので、、、ということです。

シャーレが10cm dishを指すのであれば、500cm2 プレートでやれば、たかだか25枚ですみます。
私がミトコンドリアをとって実験していた頃は、Nunc社製の500cm2のプレートをよく使っていました。

(無題) 削除/引用
No.601-10 - 2009/06/05 (金) 19:44:25 - In vivo, In vitro
>あ、賛成。たしかに293Tでシャーレ1、2まいでやっていて、その10倍ぐらいであればできる範囲だと思いますね

目的、場合にもよるのですが、200枚くらいになるので、、、ということです。

(無題) 削除/引用
No.601-9 - 2009/06/04 (木) 15:33:47 - おお
>[Re:8] 中年さんは書きました :
> 現状の１０倍必要なら、新しいことに挑戦しなくとも単に培養スケールを１０倍にするのが結局は早いのでは？

あ、賛成。たしかに293Tでシャーレ1、2まいでやっていて、
その10倍ぐらいであればできる範囲だと思いますね。

(無題) 削除/引用
No.601-8 - 2009/06/04 (木) 15:21:26 - 中年
現状の１０倍必要なら、新しいことに挑戦しなくとも単に培養スケールを１０倍にするのが結局は早いのでは？

(無題) 削除/引用
No.601-7 - 2009/06/04 (木) 15:17:37 - おお
>[Re:6] おおさんは書きました :
> バキュロとか昆虫系はどうでしょうか、、、
> カイコを使う人もいますね。

あ、バキュロは使ったって書いてあった、、、、

(無題) 削除/引用
No.601-6 - 2009/06/04 (木) 15:15:42 - おお
バキュロとか昆虫系はどうでしょうか、、、
カイコを使う人もいますね。

(無題) 削除/引用
No.601-5 - 2009/06/03 (水) 19:52:51 - In vivo, In vitro
atsさん、その系知りませんでした。参考になります。

FreeStyle発現システム 削除/引用
No.601-4 - 2009/06/03 (水) 10:57:35 - ats
接着細胞発現系の10倍程度なら、浮遊培養系（基本は一過性発現）のインビトジェン社のFreeStyle発現システムはどうですか？回収時3x10の6乗/mL以上になりますので、細胞数で10倍程度なら稼げます。もっとも多少投資が必要です。

(無題) 削除/引用
No.601-3 - 2009/06/02 (火) 20:51:17 - In+vivo,+In+vitro
＞大量ってどのくらいをお考えですか？
＞強力なプロモーターを使ってCOS7でtransientに発現すれば、タンパク質によってはCBBで見えるくらいできる場合もありますが、そんな量じゃ不十分なんでしょうか。

なるほど、具体的に量を指定する必要がありますね。私も293Tでおそらく類似の系をもっていますが（CBBで見えるくらいできる）、その１０倍くらいです。チャレンジングですか、、、。

(無題) 削除/引用
No.601-2 - 2009/06/02 (火) 20:24:58 - 中年
大量ってどのくらいをお考えですか？

強力なプロモーターを使ってCOS7でtransientに発現すれば、タンパク質によってはCBBで見えるくらいできる場合もありますが、そんな量じゃ不十分なんでしょうか。

in vitroで200kd以上というのはかなりチャレンジングな話だと思います。

巨大たんぱく質　合成系 削除/引用
No.601-1 - 2009/06/02 (火) 20:02:42 - In vivo, In vitro
In vivo, In vitroのたんぱく合成系で、巨大たんぱく質（200ｋｄ以上）に有利な大量合成システムがあれば教えてください。（局在は核か細胞質です）

いままでBaculoは試しましたが、うまくいっておりません。Baculoの修飾システムでも構いません。Baculoで大腸菌におけるように、低温で発現誘導を行ったらどうなるのでしょうか？

近くに紹介されている膜たんぱく質の合成系は非常にいいようで驚きました。
全11件 ( 1 〜 11 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を