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(無題) 削除/引用 No.599-5 - 2009/06/02 (火) 18:59:32 - DSC 通りがかりさん ありがとうございます。 論文検索の労力不足だったかもしれません。すみません。 教えて頂いたものもですが、他にも探してみます。 探せばいろいろ出てきそうなので、ひとまずCloseとさせて頂きます。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.599-4 - 2009/06/02 (火) 18:53:27 - 通りがかり こんな論文があります。探せばもっとあるでしょう。 J. Biol. Chem., Vol. 256, Issue 4, 1495-1498, Feb, 1981 An immunochemical method for mRNA purification. Application to messenger RNA encoding trypanosome variable surface antigen Proc Natl Acad Sci U S A. 1979 October; 76(10): 4927–4931. Purification and mapping of specific mRNAs by hybridization-selection and cell-free translation.

(無題) 削除/引用 No.599-3 - 2009/06/02 (火) 18:43:20 - DSC ありがとうございます。 やはり問題はコンタミとロスでしょうね。 それに、簡単に可能ならふつうにやられているでしょうし。 特定分子の塩基修飾を見たいので、逆転写を経ると意味がないのです。 全RNAで（おそらく全mRNAでも）実験を行うと、detectできませんし。 なかなか難しそうですね。

(無題) 削除/引用 No.599-2 - 2009/06/02 (火) 18:20:57 - ; まず、RNA全体の５％未満がmRNAと言われています。 そのmRNAの中で、目的のmRNAが一体何％であるかはわかりませんが、 実際、mRNAを精製されたことはありますか？ 結構、りぼそーまるRNAがコンタミしますよ。 私は、りぼそーまるRNAを除くには２〜３回精製を繰り返したりしてました。 そもそも、mRNAの精製自体、かなりロスします。それを繰り返さないと きれいにならないということは、かなりのロスを考えなければなりません。 上記のことを考えると、そんな実験を考えるのは かなりゾッとします。 ディファレンシャルとかやったことありますか？ あれはPCRを組み合わせてやるのです。 要するに、一旦増幅するという過程が加わります。 もう少し考えられた方が良いと思います。

特定のRNA分子を単離精製する方法 削除/引用 No.599-1 - 2009/06/02 (火) 17:53:48 - DSC ある目的があり、マウス脳から抽出したRNAの中からある一種のRNA分子だけを精製（あるいは濃縮）したいと考えています。Oligo(dT)を用いたmRNA精製法をmodifyして行えないかと考えています。 例えば、polyA+ RNAをBiotinylated-Oligo(dT)にハイブリダイズさせ、streptavidin-magnetic beadsに結合させて精製するキットがありますが、そのOligo(dT)の代わりに精製したいRNAの配列に相補的なオリゴヌクレオチドにビオチンを付けたもの（受託合成）を用いれば、精製は可能でしょうか？　適当な温度でオリゴとハイブリさせると非特異的なRNAも引っかかってくると思いますが、目的の分子をできるだけロスなく得たいので、標的部分の異なる２種類か３種類のオリゴで続けてゆるいセレクションをかければ、ある程度まで精製（濃縮）できると思います。 このような方法はあり得るでしょうか？　何か条件設定などにコツはあるでしょうか？　経験のある方あるいは論文などをご存知の方がおられたら、ご指南をお願い致します。もちろん、他によい方法があればご教示ください。

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