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(無題) 削除/引用 No.567-8 - 2009/05/30 (土) 13:38:50 - ami > 確かにRBCライシス２MLのあと、バッファー５０ｍｌを足したりしたら良かったです。ありがとうございました。 よかったです、RBC Lysisは軽く細胞固定みたいに効いちゃう印象があるのでそうしてます。 > すみません。 遠心を長めにするとよくなるのはなぜですか？ 脾細胞だと、なんとなく落ちが悪い(壁にくっついてる？)印象があるのでそうしてます。 # あくまで印象です

バッファー多目 削除/引用 No.567-7 - 2009/05/30 (土) 09:56:46 - マウス脾臓細胞 確かにRBCライシス２MLのあと、バッファー５０ｍｌを足したりしたら良かったです。ありがとうございました。

あの 削除/引用 No.567-6 - 2009/05/30 (土) 02:24:03 - とび主ではないですが すみません。 遠心を長めにするとよくなるのはなぜですか？

バッファーを多めに、等 削除/引用 No.567-5 - 2009/05/28 (木) 21:37:57 - mouse+splenocyte 皆様にアドバイスいただいた条件を検討してみます。リンパ球を取りたいのですが、FACSにも細胞培養にも両方使用いたします。

(無題) 削除/引用 No.567-4 - 2009/05/28 (木) 17:18:06 - こうじ SpleenでLysis bufferを使うと普通そうなります d=1.090の比重で遠心分離を行う方が安定します。

(無題) 削除/引用 No.567-3 - 2009/05/28 (木) 13:21:00 - DC 溶血の際に破砕されたリンパ球由来のDNAが原因と思われますが… 溶血後、培地で洗浄した後の沈殿をメッシュに通す事でその凝集は取り除けると思います。

(無題) 削除/引用 No.567-2 - 2009/05/28 (木) 11:43:51 - ami たぶん遠心短い(gがわからないが)。長めにする。溶血しないか、溶血終わったら遠心前にバッファーいっぱい入れる。 # 何に使うため(FACS？培養？)のどの細胞(脾細胞？リンパ球？)を集めたいのか

マウス脾臓細胞抽出時の凝集 削除/引用 No.567-1 - 2009/05/28 (木) 10:46:33 - mouse splenocyte マウス脾臓細胞抽出を、ラボマニュアルのプロトコールどおりに行っています。FACS用に使用しますが、CO2で満たして亡くなったマウスから脾臓をとり、RPMI１５ｍｌに入れ、７０マイクロのフィルターの上で５ｍｌシリンジのプラングを使い、押しつぶしながらRPMI１５ｍｌで洗います。１５００RPM５分で遠心後、上澄を捨て、タッピングしRBC溶血バッファー４ｍｌを入れて、常温5分、ここでまず最初の細胞凝集が起こります。よって、凝集部分をとらずに先の条件で遠心後、上澄を捨て、RPMI５ｍｌに溶かして、ここで2回目の細胞凝集が起こります。リンパ球１ｘ１０の６乗個を１００マイクロLに調整するため、さらに同条件で遠心後、タッピングしてRPMI３ｍｌに溶かすと、3回目の細胞凝集があり、最終のリンパ球収量はかなり少なくなりました。できるだけ、最終細胞回収量を増やしたいのですが、このやり方に改善方法はありますでしょうか？

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