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菌のDNA抽出の際の動物DNAの分離
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No.561-TOPIC - 2009/05/27 (水) 14:41:55 - まら
現在、菌のDNAを抽出しRealtimePCRで定量しています。
動物に菌を感染させるモデルのため、菌DNAを抽出させる際(動物の皮膚ごとSDSを含むbufferでボイルするため)過剰の動物DNAが混入してしまいます。
菌のDNAの回収率を下げたくないので、皮膚ごとボイルするしかないと思います。
動物DNAを菌のDNAから除くする方法、もしくは試薬があれば教えていただけないでしょうか。
宜しくお願いいたします。
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入れたら動物ゲノムが除ける試薬?
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No.561-2 - 2009/05/27 (水) 15:59:50 - ~
先行研究ではどのようにしているのですか?
独自に立ち上げようとしているのであれば、
>皮膚ごとボイルするしかないと思います。
はかなり乱暴な第1選択だと思いますが。
そのバクテリアゲノムに何か精製に使えるような特徴はあるのでしょうか?
過剰に入っている動物ゲノムを配列でアフィニティーカラムなどで除くのは無理があると思います。
バクテリアゲノムと特異的に結合できるものがあるかどうかを調べたほうが効率的だと思います。
(無いと思いますが…)
http://www.nedo.go.jp/iinkai/kenkyuu/bunkakai/20h/jigo/10/1/5-7.pdf
では、DNAにする前に分離しているようです。
DNAにする前に、マイルドな条件で細胞をばらして、比重などで細菌を回収することはできないのですか?
SDSで煮込むような乱暴な方法ではなく、DNAが切れないような回収方法を使って、
パルスフィールドなどでサイズで分けられませんか?
菌のDNA抽出の際の動物DNAの分離
削除/引用
No.561-1 - 2009/05/27 (水) 14:41:55 - まら
現在、菌のDNAを抽出しRealtimePCRで定量しています。
動物に菌を感染させるモデルのため、菌DNAを抽出させる際(動物の皮膚ごとSDSを含むbufferでボイルするため)過剰の動物DNAが混入してしまいます。
菌のDNAの回収率を下げたくないので、皮膚ごとボイルするしかないと思います。
動物DNAを菌のDNAから除くする方法、もしくは試薬があれば教えていただけないでしょうか。
宜しくお願いいたします。
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