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(無題) 削除/引用 No.560-3 - 2009/05/29 (金) 18:45:04 - Kiko AP様のご指摘のように、エタ沈による精製で十分にきれいなサザンの結果を得ることができました。 キャリアを使用してエタ沈しているので回収率も高いはずですし、時間とお金の節約にもなりました。 どうもありがとうございました！

(無題) 削除/引用 No.560-2 - 2009/05/27 (水) 14:52:18 - AP サザンのプローブなら未反応のヌクレオチドを除くための精製は必須ではないとしているプロトコールも多いです（特に最近のプロトコールでは）。なので、精製なしというのが一つの選択肢です。 精製なしでもいいくらいなのですから、カラムなどと比べれば性能は落ちるだろうけれど、EtOH pptによる精製も結構でしょう。フリーのヌクレオチドを除くためには、塩としてNH4OAcを加えてEtOH pptというのが古くからある方法です（実用上、実感上、NaOAcでもそれほど変わらないと思うけれど）。 プローブ精製用のカラムはなくても、PCR産物精製用、あるいはゲルからの切り出し用のシリカカラムはありませんか？　プローブ精製用とカラム自体はおなじなので流用できます。また、最近はプレパックの使い捨てカラムが使われることが多いですが、G50あるいはG25などのセファロースビーズがあれば、ゲルろ過精製用のスピンカラムは自作できます（Molecular Clonigなど参照）。

DNAプローブの精製法 削除/引用 No.560-1 - 2009/05/27 (水) 12:06:01 - Kiko サザン用のDNAプローブ（200bp）をKlenowとBiotinで標識することを考えています。 反応終了後の精製はエタノール沈澱でも構わないでしょうか？ 参考書をみるとゲル濾過や限外ろ過膜を使って精製しているようですが、未標識のBiotinを取り除くのが目的であればエタ沈で十分かな、と考えていました。諸事情のため、今回のためだけにさらに物品を追加購入するのに躊躇しています。

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