BioTechnicalフォーラム [STZ糖尿病誘発糖尿病マウス]

STZ糖尿病誘発糖尿病マウス

No.523-TOPIC - 2009/05/22 (金) 11:53:21 - 北村紀子

糖尿病の研究をしているものです。ストレプトゾトシンという化合物を用いて、糖尿病を誘発するマウスを作っています。

ストレプトゾトシンを使うにあったって気をつけられていることはありますか？

ストレプトゾトシンは不安定な化合物で血糖値が上がるときとあがらないときがあります。

私のプロトコルを書いておきました。

なにか問題がありましたら。指摘していただくとうれしいです。

<条件>
動物： C57/Bl　およそ20g
STZ： 200mg/kg i.p. (溶媒：0.05Mクエン酸緩衝液 pH4.5、　常温で投与）
実験：ストレプトゾトシン　マウスの体重に対して　200mg/kg
０day、4dayの血糖値を比較する。

<protcol>
クエン酸緩衝液を作成する(１００ｍｌのビンに作成しています。)クエン酸480.5mgとクエン酸ナトリウム661.8mgをとり、(この割合だとPH=4.5となる)ように、混ぜI.E.Wを95ml加え混

ぜとけるまで混ぜる。その後、オートクレーブをかけ、4度保存しておく。
↓
あらかじめ、マウスの体重を測定しておき、0dayの血液を尾静脈採血を行い、40ul採取する。
↓
ストレプトゾトシン(-20度保存)を１5mlファルコンにとり、クエン酸緩衝液に溶かさずに氷上においておき急いで動物舎へ
↓
動物舎でクエン酸緩衝液(このとき、クエン酸緩衝液は、冷た過ぎるとマウスに投与するにあたって問題があると考え、常温にほどです。)とストレプトゾトシンを混ぜる

(20mg/ml)。ストレプトゾトシンは、混ざりにくい。激しく混ぜたり、ボルテックスを用いずに転倒混和で、ゆっくり溶かす。
濃度はマウスに対してストレプトゾトシンを200mg/kgにするために、クエン酸に対してストレプトゾトシンを20mg/mlとし、このストレプトゾトシン溶液を0.1ml/gで投与しています。
↓
マウスに腹腔内投与する。クエン酸緩衝液に溶かしてから、マウスに投与するまで10min以内です。(最大、連続5匹まで投与しました。1番はじめのマウスが血糖値が上がりやすく

、最後に投与したマウスが血糖値があがりやすいということは、ありませんでした。ランダムに時々血糖値が低いマウスがいます。)
↓
4dayに、頚動脈採血を行い、血液を採取する。その後、氷上に3h～4hほどおいておき、血液が固まったことを確認したのちに遠心(13000rpm、15min)で上清をとり、これを血清と

し、血糖値を測定する。

血糖値が上がらないときの問題点として、
・ストレプトゾトシンがマウスに投与する前にストレプトゾトシンが分解してしまっている。
→混ぜ方に問題がある。
・ストレプトゾトシン溶液が、正確な量をマウスに投与できていない。
→1mlの注射筒を使っています。たとえば20gのマウスだと0.2mlストレプトゾトシン溶液を投与することになるのですが、0.01ml(1メモリ分)ずれると5%ずれる計算になります。

などを考えました。

なにかよいアドバイスがありましたら、よろしくお願いします。
　

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