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ウェスタンブロッティングのバック トピック削除
No.513-TOPIC - 2009/05/21 (木) 10:45:52 - たろう
ウェスタンブロッティングのバックグラウンドに時々、もやの様な影が映ってしまう事があります。
ブロッキングのむらが原因だと聞いて、ブロッキング液(5%スキムミルク)
を良く溶かすなどの工夫はしているのですが、やはり時々出ます。

バックをきれいに出す良いアイデアは何かありませんか??
 
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No.513-10 - 2009/05/27 (水) 22:26:47 - qq
洗いが足りなぁぁい!!
と言ってしまいます。

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No.513-9 - 2009/05/27 (水) 09:27:41 - ~
手作業でX線フィルムを現像していて、
揺すりが甘いとか、現像液などをケチって十分に浸かっていないとか…

実は誰かがX線フィルムの袋を明るいところで開けようとしてしまい、
隙間から入った光が当たったところだけ感光しているとか…

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No.513-8 - 2009/05/27 (水) 09:15:23 - りょう
ECLなら,ECL液をきちんときらずに感光しているのが,1つの原因ではないかと思います。

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No.513-7 - 2009/05/25 (月) 09:49:55 - あいうえお
ECL液がよくまざっていないともやもやがみえますよ。
ボルテックスなどでしっかりとECL液をまぜてから
エクスポーズしてください。

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No.513-6 - 2009/05/24 (日) 10:29:30 - やまかん
ほかには、感光時にメンブレンをくるむラップのしわがみえてるとか?
ためしにラップでなくてクリアホルダーとかハイブリパックとかにいれてみては。

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No.513-5 - 2009/05/22 (金) 21:40:45 - 名無し
抗体反応のときの液量が少なくて、よく液が行き渡る部分とあまり行き渡らない部分が出来ているのだと思う。ハイブリバックなどに膜をいれて、抗体液入れて、空気を追い出してから密封すれば。

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No.513-4 - 2009/05/21 (木) 15:43:54 - おお
抗体の濃度をさげる。
抗体の反応溶液のボリュームをあげ、どっぷりとつかるぐらいにする。
ブロッキング溶液や、バッファーを変更する。
検出キットを1ランク弱いものにする。

もやもやもやもや、、、、、、

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No.513-3 - 2009/05/21 (木) 11:35:00 - AP
情報を求めるなら、もっと丁寧に説明するべきではないかな。ウェスタンといってもやり方は数多あるのだし、漠然と質問されても答えにくいし、せっかく回答が寄せられても、あなたのシステムには当てはまらなくて、回答してくれた人に無駄骨をおらせてしまうかもしれないですよ。

材料・対象、抗体や標的タンパク質の属性について(掲示板にかける範囲で)、検出方法(酵素抗体なら酵素の種類とか、発色なのか蛍光なのか、発光なのか。発光ならばフィルムかカメラかなど)、なにか製品版のシステムを使っているならそれは何かとか(アマシャムのECLとか)。

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No.513-2 - 2009/05/21 (木) 10:53:49 - 通り
もや?

ウェスタンブロッティングのバック 削除/引用
No.513-1 - 2009/05/21 (木) 10:45:52 - たろう
ウェスタンブロッティングのバックグラウンドに時々、もやの様な影が映ってしまう事があります。
ブロッキングのむらが原因だと聞いて、ブロッキング液(5%スキムミルク)
を良く溶かすなどの工夫はしているのですが、やはり時々出ます。

バックをきれいに出す良いアイデアは何かありませんか??

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