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(無題) 削除/引用 No.512-6 - 2009/05/21 (木) 16:39:35 - ~ 昔、SSCだとカピカピのDNAが溶けやすいと聞いたことがあります。 ただ、x1なのかx20なのかの記憶がありません。

(無題) 削除/引用 No.512-5 - 2009/05/21 (木) 15:59:52 - おお 乾燥させると厳しいと思うなあ、、、、、 TEに溶かして50度ぐらいで数時間とか、、 SDS/SDSーPKで50度ぐらいで数時間とか、 8M尿素で50度で数時間とか、 6M GuHClで溶かすとか、、、、 上記TEいがいであれば、えたチンなどでもう一回 精製し直さないといけない、、、

(無題) 削除/引用 No.512-4 - 2009/05/21 (木) 11:26:28 - Pumpkin 高分子のゲノムが取れた場合は、（精製不十分や乾燥しすぎたせいかどうかもありますが）非常に溶けにくいですね。4℃でオーバーナイトしても溶けないことがざらにあります。しかし、Pさんのおっしゃる通りPCRをかけるときには全部が溶けている必要もないので、とりあえず一部分取してPCRをかけて見られてはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.512-3 - 2009/05/21 (木) 11:25:37 - AP >それでもまだ溶けてないので、もう1日くらい室温で置いておこうかと思うのですが、ゲノムが壊れてしまったりしないか不安です。 DNaseの痕跡による分解を心配しているのだとしたら、精製方法・精製度によりますので、どれくらいの期間おいておけるかは一概にはいえません。 ただ、一日なら大丈夫だけれど二日目には壊れるというのもおかしな話で、二日目には分解してしまうような精製だったら、一日だってだめでしょう。 >かぴかぴに乾いてしまったせいか、 なんで、そうなったんでしょうね。 プラスミドなんかも本当はそうなんですが、ゲノムのように高分子DNAだととくに、強く乾燥させてはだめです。ゲノムなら70% エタノールでリンスして、上清を良く吸い出すが、チューブを逆さにおいてエタノールを切るくらいでいいです。乾燥させるとしても、室温に放置で30分くらいとか。少々エタノールが残っていても、溶解したり反応液に調製する段階で、問題ないくらいに希釈されます。

(無題) 削除/引用 No.512-2 - 2009/05/21 (木) 10:58:13 - p 完全に乾燥してしまったものはなかなか溶けないと思います。 というか、全く溶けなくなることもあると思います。 服に着いた汚れでも、乾燥してしまう前に洗うと落ちやすいのと同じです。 私はエタ沈で、乾燥させてからTEなどに溶かせとプロトコールに書いてあったとしても、 そんなことしません。少し湿っているくらいで溶かします。 ただ、PCRの鋳型は少なくていいので、一部でもそれくらいのDNAは溶けているかもしれません。

精製したゲノムの取扱い 削除/引用 No.512-1 - 2009/05/21 (木) 10:27:23 - たろう 昨日、マウスの尾からゲノムを精製しました。 ただのPCRをするのですが、精製後、かぴかぴに乾いてしまったせいか、 なかなかTEに溶けてくれません。 プロトコールでは、室温でオーバーナイトで置いておけと書いてあります。 それでもまだ溶けてないので、もう1日くらい室温で置いておこうかと思うのですが、ゲノムが壊れてしまったりしないか不安です。 こういう場合みなさんはどうされていますか？

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