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DNApolymeraseの使い分け トピック削除
No.50-TOPIC - 2009/02/18 (水) 17:19:14 - たいあ
皆さんどのようにされていますか?
使用感や使い分けなどお聞きしたいです。

私は、
通常のクローニング:KOD plus ver.2
コロピー:Tfi polymerase (promega)
KODで増えない:Prime star / Phusion
早く帰りたい:Phusion
血液などの汚いサンプルからのPCR:Phusion Blood Direct kit

な、感じです。
 
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No.50-9 - 2009/02/21 (土) 20:00:46 - s
増えて確認できさえすればいいものに関しては
takaraの一番安いtaq
プロダクトにミスが入ってほしくないものは
GXL
の二極です。

(無題) 削除/引用
No.50-8 - 2009/02/21 (土) 11:02:05 - たいあ
PrimeStar GXLはたしかにいい系ですね。
先日も、KODplusver2で増えてこなかったGC-richな
プロモータ領域が、一発で増えてきました。へぇ〜と
思った記憶があります。

TOYOBOフリークな私としてはKODFXも使ってみたいなぁと
おもったりして。全血からの使用感をお持ちの方いらっしゃいませんか?
一応情報はちょっとはTOYOBOからでていますが、
AmpDirectやPhusionBloodDirectKitとの比較をされた方いないかなぁーと。
上記ふたつでは、後者の方が血液からは成功確率が高い感じがします。

(無題) 削除/引用
No.50-7 - 2009/02/21 (土) 03:17:28 - GXL万歳
なんだか最近は PrimeSTAR GXL で全て済んでしまう気がしてます・・・。
それほど高くないですし。

(無題) 削除/引用
No.50-6 - 2009/02/21 (土) 02:37:42 - DSC
pgdさんも書かれていますが、KOD-FXも5個目の選択肢(汚いサンプル)の有望株だと思います。crudeな試料が得意というのがウリのようです。以前髪の毛からまずDNA抽出してからPCRにかけてgenotypingしていましたが、KOD-FXなら、反応のmixtureに未処理の髪の毛(毛根部分)を突っ込んだだけで十分増えます。ずいぶん楽できるようになりました。

(無題) 削除/引用
No.50-5 - 2009/02/21 (土) 00:16:15 - genji
昔は私も色々使い分けていましたが、今はすべてKOD-Plus-Ver.2で行っています。
colony direct PCRもKODです。(unit数をがつんと減らします)
1KU単位で購入しています。

(無題) 削除/引用
No.50-4 - 2009/02/19 (木) 09:20:18 - ~
ここ2年くらいmolecularな仕事をしていないので、
もっといい酵素はあるのでしょうけれども。

普段使い:Sigma のtaq polymerase (または他で一番安いもの)
クローニング用:LA-taq with GC buffer
LA-taqで増えない場合:Phusionなどラボにあるだけ

(無題) 削除/引用
No.50-3 - 2009/02/18 (水) 23:47:40 - Pumpkin
そこまでいくつもの種を使い分けていないですね。クローニングには、ClontechのAdvantage 2 PCR kitを使っています。これで取れなかったことは今のところありませんので。コロニーPCRをやるのであれば、フィンザイムとかとにかく安い酵素を使います。

(無題) 削除/引用
No.50-2 - 2009/02/18 (水) 20:30:25 - pgd
最近、genomicPCRにはKOD-FXをよく使います。
増えすぎる場合もありますが・・・。

DNApolymeraseの使い分け 削除/引用
No.50-1 - 2009/02/18 (水) 17:19:14 - たいあ
皆さんどのようにされていますか?
使用感や使い分けなどお聞きしたいです。

私は、
通常のクローニング:KOD plus ver.2
コロピー:Tfi polymerase (promega)
KODで増えない:Prime star / Phusion
早く帰りたい:Phusion
血液などの汚いサンプルからのPCR:Phusion Blood Direct kit

な、感じです。

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