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リポフェクタミンを用いたLuc安定株作成法
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No.442-TOPIC - 2009/05/11 (月) 23:45:17 - ひな
リポフェクタミン2000を用いて、ラットC6細胞にpCMV/Lucを導入したいのですが、プロトコールがいまいち詳しく分かりません。
プラスミドを細胞へトランスフェクションする場合の詳細なプロトコールなど、ご存知でしたらどなたかお願いします。ちなみにセレクションはG418を使う予定です。
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No.442-6 - 2009/05/15 (金) 13:08:26 - とも
Rat C6細胞を使った実験をしたことのある人に聞くのがベストです。
あと安定株を作るなら、plasmidをlinearizeした方がベストです。
染色体に組み込まれる効率が10倍くらい上がるそうです。
あきらめたら?
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No.442-5 - 2009/05/15 (金) 03:42:35 - ピペド
こんなもの普通に調べればわかりませんか?
本当に全くの初心者ならまだいいのですが、それでも教科書、添付書類、ウェブサイトなんで調べようがあると思います。
それなりに経験をつんだ方だとしたら、この質問はあまりにお粗末です。
いずれにせよ、この内容は基本中の基本で、人の経験に頼る類の内容ではありません。
(無題)
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No.442-4 - 2009/05/12 (火) 10:37:46 - ~
もしかして、あまりリンクを貼ると書き込めなくなるのでしょうか?
4つほどリンクを貼って書き込んだらトップページに戻ってしまい、
それを削除したら書き込めました。
googleで"lipofectamine 2000 protocol"で検索すれば、
2ページ目までに貼ろうとしていたリンク先がヒットすると思います。
(無題)
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No.442-3 - 2009/05/12 (火) 10:36:11 - ~
試薬の添付書類にプロトコルが書かれていますし、
ネット上にもプロトコルは書かれていますよね。
どこまで詳細に書かれていないと理解できないのか分かりませんが、
読んでも意味が分からないのでしたら、経験者に教わりに行くのが早いと思います。
(無題)
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No.442-2 - 2009/05/12 (火) 08:18:09 -
おお
インビトロジェンのホームページで扱ってます。
DNAをOPTI-MEMに溶解、同時に違うチューブにリポフェクタミン、OPTI-MEM混合液をつくり
インキュベーションして、両者をまぜてさらにインキュベーションして、バイチに加える
って感じだったと思います。
リポフェクタミンを用いたLuc安定株作成法
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No.442-1 - 2009/05/11 (月) 23:45:17 - ひな
リポフェクタミン2000を用いて、ラットC6細胞にpCMV/Lucを導入したいのですが、プロトコールがいまいち詳しく分かりません。
プラスミドを細胞へトランスフェクションする場合の詳細なプロトコールなど、ご存知でしたらどなたかお願いします。ちなみにセレクションはG418を使う予定です。
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