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Cy5を用いた蛍光染色
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No.439-TOPIC - 2009/05/10 (日) 14:01:06 - やまもと
Cy5標識された二次抗体で免疫染色をする予定です。そこで、撮影時の注意点などがありましたら、多くの経験者の方々のご助言としていただけましたら幸いです。よろしくお願いいたします。。
特に、フィルターを通しては視覚化できずにモニターのみで観察できるというところの説明をしていただけましたら、ありがたいです。
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(無題)
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No.439-7 - 2009/05/26 (火) 04:45:08 - 通りすがり
>肉眼でみえないということは、どうやって撮影時の画像を決定するのです
>か?Cy5のフィルターを通すと肉眼では見えないのにデジタル画像では可視で
>きるのはなぜですか?
いやあ.....それは、いくらなんでも初歩的すぎるし、
インターネットを使えば現代では検索できるのにここで
わざわざ聞くことではないですよ。
どうりで他の方が時間を使って回答をしてくださってるのに
何かかみ合ってないと思いましたわ。
一応今検索したら2秒で参考のサイトとか大量にでてきました。
参考のサイトの一例を下にはっておきますが、
正直これとか読んで理解できないとか言われると困りますねえ.....
http://www.microscopyu.com/articles/fluorescence/filtercubes/filterindex.html
http://www.microscopyu.com/articles/fluorescence/filtercubes/red/redhome.html
(無題)
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No.439-6 - 2009/05/26 (火) 04:19:26 - やまもと
肉眼でみえないということは、どうやって撮影時の画像を決定するのですか?Cy5のフィルターを通すと肉眼では見えないのにデジタル画像では可視できるのはなぜですか?初歩的な質問で恐縮です。
(無題)
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No.439-5 - 2009/05/11 (月) 21:29:54 - CJ
私も他の方と同意見です。Cy5やAlexa647を使うときには1次抗体がきちんとワークしていて、どのような部位を染めるのかが完全にわかっていることが重要です。ですから私の場合、新規に見たい物を赤や緑で染色して、対比染色的なものをCy5に割り当てます。
プロトコルには何も違いはありません。
(無題)
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No.439-4 - 2009/05/11 (月) 20:44:22 - 通りすがり
Alexa488とかFITCで染めるときと同じですよ。
Cy5だからといって特にプロトコールが異なるということはないです。
多重染色する予定が無いのならAlexa488の方がオススメです。
(無題)
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No.439-3 - 2009/05/11 (月) 12:40:46 - やまもと
Cy5の蛍光染色をしたことのある方はたくさんいるかと思われます。どのようにしたか、教えていただけますか?便利なサイトなどありましたら教えていただけましたら幸いです。
よろしくお願い致します。
シグナルによっては
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No.439-2 - 2009/05/11 (月) 12:40:03 - かよ
シグナルが強ければそう苦労もないかと思うんですが、微弱なときは肉眼で見えないだけにつらいものがありますね、Cy5とかAlexa647は。ここは絶対に染まる、とわかっている場所を見つけられれば、手動調整で何とか見えるようにできる、というような場合があるんですが、どこが染まるのかさえわからないようなサンプルだと、非常につらいです。どーしても見にくいサンプルの場合、可視化できる色で先に単独で染めて確認してから、二重染色に使ったりもしています。
Cy5を用いた蛍光染色
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No.439-1 - 2009/05/10 (日) 14:01:06 - やまもと
Cy5標識された二次抗体で免疫染色をする予定です。そこで、撮影時の注意点などがありましたら、多くの経験者の方々のご助言としていただけましたら幸いです。よろしくお願いいたします。。
特に、フィルターを通しては視覚化できずにモニターのみで観察できるというところの説明をしていただけましたら、ありがたいです。
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