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(無題) 削除/引用 No.415-4 - 2009/05/02 (土) 21:19:51 - スノ CJ様、AP様 回答頂きありがとうございます。 確かに、DEPC自体は炭酸エステル化合物であり、 オートクレーブにより加水分解されるようなものなのに、 塩基で分解されないわけないですね。 考えが及びませんでした。 また、NaOHにはRNase除去作用もあるのですね。 今回のことは実験に反映していこうと思います。 本当にありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.415-3 - 2009/05/01 (金) 22:39:57 - AP アルカリ溶液はタンパク質を強力に可溶化、変性させるのでDEPC処理は必要でないでしょう。器具のRNaseを除去する選択肢の一つとして、強アルカリに耐えるものならNaOHやKOHで洗うというのもあります（ということを言いたかったんですが）。大体、強アルカリ条件でDEPCは働くんでしょうか。RNaseなど有機物と反応する前に、加水分解されてしまいそうです。

(無題) 削除/引用 No.415-2 - 2009/05/01 (金) 22:22:51 - CJ > という、大変参考になる回答があったのですが、ひとつ疑問 > が生じました。 > それは、0.2M NaOHまたはKOHを調整する際、DEPC処理を > する必要があるかどうかということです。 せんでいいんでないですか？「ナンセンス」と同じ理由で。 > > > （RNase不活性化も期待できる方法です） > とあるのですが、これが、どこまで掛かっているのかが > 分かりませんでした。 NaOHやKOHの存在下でRNaseが活躍できるとは思えません。

mRNA抽出の際のポリトロンホモジナイザーの処理について 削除/引用 No.415-1 - 2009/05/01 (金) 13:09:06 - スノ 最近分子生物学的実験に関わり始めたばかりの 初心者ですがよろしくお願いします。 BioTechnicalフォーラムでトピックを検索したら、 http://www.kenkyuu.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?mode=view;Code=2261 > No.2261-4 - 2008/11/06 (木) 23:45:32 - AP > 生物組織から抽出を行う場合、一番のRNaseソースは生物組織自身です。 > それでも、たとえRNasが豊富な膵臓や肝臓であっても、迅速にRNaseを > 失活できるように抽出法がデザインされているはずなので、ホモジナイズ > する段階で使われる器具を、オートクレーブなどRNaseを失活させる > 目的の処理をするのは「ナンセンス」だと思います。普通に、 > きれいに洗浄しておけば十分です。RNaseの汚染がどうしても > 気になるなら、過酸化水素水で処理、あるいは 200℃以上の乾熱滅菌 > した方がオートクレーブより信頼できます。なにしろ、 > オートクレーブでは失活できないということがわかっているのですから。 > > ただ最近は、PCRベースで検出を行ったりするので、RNaseのコンタミ > より、RNAやDNAのキャリーオーバーのほうに神経を使います。 > 0.2 MくらいのNaOHやKOHで処理（RNAを加水分解するほか、 > ガラス器などの表面が汚れごと溶け落ちる）、UV照射と塩酸処理 >（DNAの分解、不活性化）などを考えます（RNase不活性化も期待 > できる方法です）。 という、大変参考になる回答があったのですが、ひとつ疑問 が生じました。 それは、0.2M NaOHまたはKOHを調整する際、DEPC処理を する必要があるかどうかということです。 > （RNase不活性化も期待できる方法です） とあるのですが、これが、どこまで掛かっているのかが 分かりませんでした。 よろしくお願いします。

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