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(無題) 削除/引用 No.3953-3 - 2011/02/18 (金) 21:24:13 - EGFP-TG_mouse Actiasさん ありがとうございます。 このEGFP-TG_mouseは海外の研究室から譲り受けたもので、 譲り受け後、諸事情により、すぐに精子凍結にて保存されていたものを バックグランド(wild type)のマウスに産ませた状況です。 その仔らのgenotypingはすべて陽性でしたので 保存された精子はすべてEGFP遺伝子は持っていると思います。 しかしながら、 どこまでコンジェニック化、コピー数は不明です。 バックグランドのマウスに産ませた仔同士を掛け合わせ、 その中のどれがホモかを見出すために、 wild typeと掛け合わせて生まれた仔すべてがEGFP発現していれば wild typeと掛け合わせたTGマウスはホモの可能性があるとして判断しようとしています。 この時に、EGFP発現の程度が兄弟姉妹でずいぶん違っていました。 最初は、蛍光顕微鏡の観察で、EGFP発現がないと判断した仔のgenotypingが陽性となったことから、よくよく蛍光顕微鏡で観察すると、組織のほんの一部で発現が見られました。 コピー数が一定でないのかもしれないとも思えますが、 兄弟姉妹間でもそのようなバラツキがありますでしょうか？ よろしくお願いします。 > EGFP導入領域の活性化／不活性化もあるけど。 > > そのマウスは、どこまでコンジェニック化が進んでいるのでしょうか？ > > コピー数は？ > > たとえばコピー数１なら、当然、ホモ個体ではありません。（性染色体を除く）。 > コピー数２なら、ホモか、ヘテロ。ヘテロの場合でも、同じ染色体に2個載っているか、別の染色体に1個ずつ載っているか。別の染色体といった場合でも、2番と2番も有りだし、2番と10番もある。 > >

(無題) 削除/引用 No.3953-2 - 2011/02/07 (月) 22:46:43 - Actias EGFP導入領域の活性化／不活性化もあるけど。 そのマウスは、どこまでコンジェニック化が進んでいるのでしょうか？ コピー数は？ たとえばコピー数１なら、当然、ホモ個体ではありません。（性染色体を除く）。 コピー数２なら、ホモか、ヘテロ。ヘテロの場合でも、同じ染色体に2個載っているか、別の染色体に1個ずつ載っているか。別の染色体といった場合でも、2番と2番も有りだし、2番と10番もある。

トランスジェニックマウスのホモの作製 削除/引用 No.3953-1 - 2011/02/07 (月) 18:32:08 - EGFP-TG_mouse いつも、お世話になっております。 EGFPが細胞特異的プロモーターにて発現するトランスジェニックマウス(TG_mouse)の ホモを作製中です。 TG_mouseの場合、 ゲノムのどこにEGFP等の遺伝子が導入されているか不明ですので、 TG_mouse　x Wildにて生まれてきた仔がすべてgenpypingで陽性であれば、 親のTG_mouseがホモの可能性が高いと言った手段で推定しています。 genpypingはプロモーターとEGFPの間の領域を検出しています。 genpyping以外に組織を蛍光顕微鏡下でEGFPを観察していますが、 TG_mouse x Wildにて生まれてきた仔のEGFP発現強度にバラツキがあります。 多数の細胞が強くEGFPを発現している仔もいれば、 EGFP発現細胞数が極端に少ない同腹の仔もあります。 この発現細胞数のバラツキの理由は、 EGFPが導入されている染色体(の領域？)は不活性化されていて、 相同染色体の方が活性化されているため、 EGFP発現細胞が少ないのでしょうか？ ご助言、コメントやご意見をいただければと思います。 よろしくお願い致します。

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