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(無題) 削除/引用 No.3932-7 - 2011/02/07 (月) 13:14:21 - さく 私も昔同じような事があって、切断をカラム内で行ってモノを溶出させる方法でうまくいったように記憶しています。 とりあえずこれで切れたので、原因までは追及しませんでした。

カラム 削除/引用 No.3932-6 - 2011/02/07 (月) 12:37:52 - カラム GSTカラムの洗浄（もしくは再生？）が不十分で GSTが結合できない可能性はありますか？ 新しいカラムを使用できる環境だとうらやましいですね

タンパク質の精製 削除/引用 No.3932-5 - 2011/02/06 (日) 16:57:28 - mamosan トロンビンではないです。 トロンビンの分子量は37kDaなので違うかと。

(無題) 削除/引用 No.3932-4 - 2011/02/04 (金) 09:11:06 - ばいや GSTではなくトロンビンってことはないですよね

タンパク質の精製 削除/引用 No.3932-3 - 2011/02/04 (金) 00:46:13 - mamosan ＞TK-1さん reduced glutathioneはバッファー交換で除いています。

(無題) 削除/引用 No.3932-2 - 2011/02/04 (金) 00:02:32 - TK-1 一つ基本的なことを確認したいのですが、Thrombinで処理する前にバッファー交換などでreduced glutathioneはのぞいていますよね。

タンパク質の精製 削除/引用 No.3932-1 - 2011/02/03 (木) 21:59:40 - mamosan 現在、GST発現系を用いてタンパク質の精製を試みています。 大腸菌から抽出したタンパク質を、GSTカラムに供し、溶出した融合タンパク 質をスロンビン処理しました。 そのスロンビン処理した溶液を再度GSTカラムに通すことで、パススルーの画 分を回収し、目的タンパク質を得ようとしています。 回収したタンパク質をSDS-PAGEに供したところ、GSTタグも一緒に出てきて おり、タグがカラムに結合していませんでした。 （カラムに溶出バッファーを加えても、GSTタグのタンパク質は溶出されてきませんでした。） この理由として考えられることは何でしょうか？ また、解決策はありますでしょうか。

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