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primer3で論文のプライマーがヒットしない
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No.3824-TOPIC - 2011/01/14 (金) 16:16:55 - tomy
あるmRNAに対するプライマー情報が論文に記載してあり、プロダクト産物の長さを確認するためにprimer3で再検索しています。Sense鎖(Primer3ではleft primer)は論文同様の配列でHitしますが、Antisense鎖(Primer3ではright primer)がHitしません。なぜでしょうか?
論文にはAntisense鎖として、5'---3'の方向でprimerの塩基配列が書いてあります。
よろしくお願い致します。
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No.3824-3 - 2011/01/15 (土) 09:25:49 -
Actias
僕が論文の査読を依頼されたときに確認している著者のうっかりミス
違う生物の配列を書いた(ヒト/マウスの勘違、とか)
配列を逆のみや相補のみにしていた
同じ論文のA遺伝子のとB遺伝子のが同じ(コピペミス?)
Sense鎖配列が正解ということは、目的遺伝子が分かっていて、Sense鎖プライマーの場所と伸ばしたい向きが分かっている。僕なら伸ばす長さがむちゃくちゃ長いのでなければ、いろいろやるより目で見ます。
(無題)
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No.3824-2 - 2011/01/14 (金) 16:34:36 - eP
単に、入力したAntisense鎖が、
Primer3のPrimer設計条件の初期設定値の範囲外なため、
うまく表示されないだけでは??
あとは、たまたまSNPがあるか、別のスプライシングアイソフォームのエクソンジャンクション上か、
Reverse Complementをするのを忘れた、著者のうっかりミスか。
まあ、PCR産物の長さを見る時は、NCBIのe-PCRの方がいいでしょうけど。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/e-pcr/reverse.cgi?orgdb=0&taxid=&type=table&ststext=&margin=10000&mism=2&gaps=2
primer3で論文のプライマーがヒットしない
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No.3824-1 - 2011/01/14 (金) 16:16:55 - tomy
あるmRNAに対するプライマー情報が論文に記載してあり、プロダクト産物の長さを確認するためにprimer3で再検索しています。Sense鎖(Primer3ではleft primer)は論文同様の配列でHitしますが、Antisense鎖(Primer3ではright primer)がHitしません。なぜでしょうか?
論文にはAntisense鎖として、5'---3'の方向でprimerの塩基配列が書いてあります。
よろしくお願い致します。
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