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(無題) 削除/引用 No.3823-7 - 2011/01/19 (水) 18:25:35 - carbox 有難うございます。 リンク先の情報も参考にして、プロトコールを改善してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.3823-5 - 2011/01/16 (日) 14:25:34 - 弘法 古いbait用ベクターですが、pGBT9はpGBKT7よりも発現量が低いのでbaitに起因する毒性が緩和されるかもしれません。 ref. http://www.clontech.com/products/detail.asp?product_id=207215&tabno=10&faq_id=153992

(無題) 削除/引用 No.3823-4 - 2011/01/14 (金) 21:51:56 - carbox 弘法様、お返事有難うございます。 bait用プラスミドはpGBKT7を使っています。 おっしゃる通り、擬陽性が多いような気がします…。 同時トランスフォーメーションでの対応も考えましたが、クローン数が多く現実的に難しいです。

(無題) 削除/引用 No.3823-2 - 2011/01/14 (金) 15:05:37 - 弘法 私自身はやったことがないのですが、キットを使わないとするとこれが有名です。 http://www.nature.com/nprot/journal/v2/n1/abs/nprot.2007.17.html baitの入った細胞の成長が遅いと、擬陽性が出やすくて苦労するという印象があります。そちらに改善の余地はないでしょうか。bait用プラスミドは何をお使いですか？

Frozen Yeast Competent Cellsの作製 削除/引用 No.3823-1 - 2011/01/14 (金) 14:51:15 - carbox はじめまして。 現在ツーハイブリッドを行っており、数種類のpreyが釣れました。 そこで、インタラクションを再チェックするためにpreyをbaitのみの細胞に入れているのですが、baitの入った細胞は生育が遅くcompetent cellを調製するのが難しい状態です。そこで、frozen competent cellを検討しています。良いプロトコールやメリット、デメリットがあればご教授願います。

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