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ノックアウトの手法について トピック削除
No.3781-TOPIC - 2011/01/06 (木) 18:32:20 - やかん
 はじめまして。大学で生物工学を専攻しているものです。
 今回、教授の先生に言われて、遺伝子のノックアウトをすることになりました。
 ノックアウトしたい遺伝子に、抗生物質の遺伝子を入れこんで、元の細胞に入れ込み相同組換えを起こさせて変異を起こす方法らしいです。
 スクリーニングはその入れ込んだ抗生物質耐性を使って行うようです。
 探してみたのですが、論文が見つからず困っています。どなたかご存知でしたら教えていただけませんでしょうか。
 
 
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No.3781-8 - 2011/01/24 (月) 21:17:56 - Actias
どう解決したかを書いてほしい。

(無題) 削除/引用
No.3781-7 - 2011/01/21 (金) 15:07:15 - yakan
みなさんありがとうございました。
かいけつしました。

(無題) 削除/引用
No.3781-6 - 2011/01/07 (金) 15:51:08 - ut

> 説明が足りない部分があったと思いますが、私がやりたいのは組換えではなくノックアウトです。


組換えをせずにノックアウトとは、通常の遺伝子ノックアウトではないのでしょうか?????
また他の人も書いてますが、ES細胞で?他の細胞で???

(無題) 削除/引用
No.3781-5 - 2011/01/07 (金) 10:06:01 - ~
貴方がラボでノックアウトの系の立ち上げを求められているのでしょうか?
ラボで過去に行なわれていて、関係書籍や論文が揃っていたりしませんか?
立ち上げるのであれば、系のあるラボに教わりに行くのも視野に入れておいたほうがいいかと思います。


また、探しているのは論文なのですか?
論文だけ見ても、書かれている情報だけで再現するのは大変だと思いますけど。

ジーンターゲティングの最新技術―効率よく確実なマウスの遺伝子組換えとクローン作製法 (ザ・プロトコールシリーズ) [大型本]
八木 健 (編集)

マウスラボマニュアル―遺伝子の導入と解析を中心に [単行本]
東京都臨床医学総合研究所実験動物研究部門 (編集)

などの日本語の実験書を見たほうが、何をすればいいのか分かりやすいと思います。
(やりたいのがマウスなのかわかりませんが)

(無題) 削除/引用
No.3781-4 - 2011/01/06 (木) 21:51:40 - Actias
何の生物でやるのでしょうか?

Thermus thermophilus HB8
dna.brc.riken.jp/lab/dna/en/thermus_3en.html

Escherichia coli
http://www.shigen.nig.ac.jp/ecoli/strain/nbrp/explanation/keioCollection.jsp;jsessionid=EAFA61AE4D8F40B8ADFD6E02602276C3.4_4

Bacillus subtilis
http://www.shigen.nig.ac.jp/bsub/jsp/strain/aboutGeneDisruptant.jsp

原核生物なら上記があります。

たぶん、ヒトかマウスの細胞でしょうけど。
基本的な考えは同じはず。

(無題) 削除/引用
No.3781-3 - 2011/01/06 (木) 19:48:14 - やかん
返信ありがとうございます。
説明が足りない部分があったと思いますが、私がやりたいのは組換えではなくノックアウトです。
RNAiなどを用いる方法もあるとは思いますが、今回は先に書いた方法で行ってくれとのことです。
ご存知の方がいらっしゃいましたらよろしくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.3781-2 - 2011/01/06 (木) 18:44:15 - なべ
http://www.sc.fukuoka-u.ac.jp/~bc1/Biochem/genetech.htm#transfect
日本語のものをまず読まれるのがよいでしょう。
そして疑問点を教授の先生に聞くのです。

上のURLは適当にググったら出てきたもので、あなたの求めるものとは違うかも
知れません。
その場合、キーワードを自分なりに考えて検索すれば良いです。

ノックアウトの手法について 削除/引用
No.3781-1 - 2011/01/06 (木) 18:32:20 - やかん
 はじめまして。大学で生物工学を専攻しているものです。
 今回、教授の先生に言われて、遺伝子のノックアウトをすることになりました。
 ノックアウトしたい遺伝子に、抗生物質の遺伝子を入れこんで、元の細胞に入れ込み相同組換えを起こさせて変異を起こす方法らしいです。
 スクリーニングはその入れ込んだ抗生物質耐性を使って行うようです。
 探してみたのですが、論文が見つからず困っています。どなたかご存知でしたら教えていただけませんでしょうか。
 

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