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(無題) 削除/引用 No.3751-6 - 2011/01/03 (月) 08:05:47 - 免疫染色素人 たぶんさん わたしも調べてみたのですが、そのとおりでした。顕微鏡で見る場合は、特殊なフィルターが必要みたいです。 Tbさん Amiさんもおっしゃっていましたが、PEの退職時間の早さが一番の問題のような気がします。安定度の高いAlexaシリーズを用いてみたいと思います。 たぶんさん、Tbさん、本当にご親切に教えてくださいましてありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.3751-5 - 2010/12/30 (木) 14:57:39 - Tb PEは量子収率が非常に高いうえに、赤色系で自家蛍光が少ない領域なのでFACSには最高の色素ですが、AmiさんのいうとおりPEは蛍光顕微鏡では退色が早いし、たぶんさんのいうFITC/Alexa488とのエミッションスペクトルのオーバーラップもひどいですよね。FACSは定量性に優れているので、"compensation"で問題なく補正してみせますが、蛍光顕微鏡だと補正してもうーん・・・。 FACSだと昔は、たぶん大きさと値段の関係でしょうが、488 nmレーザー1本でやっていたから、488でたたける赤色色素は重宝してきましたが、蛍光顕微鏡は水銀ランプの時からローダミンとか励起できていたので、自然、レーザーに移行しても複数レーザー搭載が当たり前のように思いますので、あえてPE使う理由がないんでしょう。

(無題) 削除/引用 No.3751-4 - 2010/12/30 (木) 12:27:53 - たぶん PEを使うと、FITCやAlexa488などと二重染色するとき、 顕微鏡のフィルター（特に蛍光波長を透過する吸収フィルター）を特殊な組み合わせにしないと、 漏れ込みがおきてしまうので、避けているのではないでしょうか・・・。

(無題) 削除/引用 No.3751-3 - 2010/12/30 (木) 10:47:58 - 免疫染色素人 amiさん 本当に教えていただいてありがとうございます。 この情報は、非常に役に立ちます。Alexaなどがラベルしているものを使用していた考えていたのですが、これがまったく上に認めてもらえず、なぜかPE以外の抗体しか許してもらえませんでした。 教えていただいたことを、うまく説明して方法を変えようと思います。 本当にありがとうございます。

輝度っていうか 削除/引用 No.3751-2 - 2010/12/30 (木) 09:57:27 - ami PEは励起したあと光っている時間が短いので、同じところを長く見ていられない。FACSだと問題にならないけど、免疫染色だと問題になる。退光が早い、とか言う。

APCとPE ラベルについて　 削除/引用 No.3751-1 - 2010/12/30 (木) 08:48:41 - 免疫染色素人 最近、PE-Rラベルで標識された抗体で免疫染色を行っています。 Flow cytometryなどでは、PE labelを使用しているものなどをよく見ますが、組織染色でPE labelを用いている論文はほとんど見かけないように思えます。APC labelなどは、Flow cytometryでも組織染色でも見かけたことがあります。 APCとPEがどれくらい輝度が違うのかなどがわかるサイトや知識をお持ちの方がいましたら教えていただけないでしょうか？ 色々と調べてみたのですが、APCとPEの差がどれくらいあるのかがわかりません。 以上です よろしくお願い申し上げます。

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