Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム | このフォーラム | ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

凍結切片 トピック削除
No.3716-TOPIC - 2010/12/20 (月) 19:35:29 - aa
胎児や成体の脳切片を切るさいにどのようにしたらキレイに垂直に切り出せるのでしょうか。

脳内影響を見るため試薬などを打ったのですが、切片にしたときに垂直に切れなかったため鮮明なトラクトが見れませんでした(斜めに切り出していたようです)

切片作製まではPFA固定→スクロース脱水→OCTコンパウンド包埋という流れです。包埋時は脳をたてて置き、小脳側が底にくるようにしてます。
実際に切り出すときは、切り出した面を目安に微調整をしているので左右対称にすることはできますが、上下の調節は困難な印象です。

みなさんは切片作製のさいにどのようにされてるのでしょうか?なにかいいアドバイスがあればよろしくお願いします。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



4件 ( 1 〜 4 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.3716-4 - 2010/12/21 (火) 19:21:00 - よっしー
私は固定後,切片が欲しい場所の少し前か少し後ろで,切片を作りたい角度で切り落とします.
切断面を下にして,OCTで凍らせてます・
切片を切る時に,切断面側から切り始め,stuさんのおっしゃるように,台の角度で調整しています.
これで問題なく,簡単にできていますよ.

(無題) 削除/引用
No.3716-3 - 2010/12/21 (火) 19:13:08 - stu
まずは切片を切り、
その切片とbrain mapを見比べて(脳室や脳の大きさなどを見比べて)どのあたりをどの方向で切っているのかを判断し、
まっすぐ水平になるように切片台の角度を微調整する。
これを何回か繰り返して、brain mapと同じ切片像が得られるようにします。

練習あるのみです。

(無題) 削除/引用
No.3716-2 - 2010/12/21 (火) 00:21:13 - shu-t
既固定凍結切片ではありませんが,新鮮凍結切片の場合だとOCTコンパウンドに包埋せず,そのまま凍結して切片を作製するという方法があるようです。とある技術講習会に参加した際に,脳を専門やっている講師の先生がそうされてました。曰く,包埋すると脳のどこを切っているか分からなくなるから,包埋しないとのことです。切るところを見せてもらいましたが,確かに脳のどこを切っているかが方向も含めてはっきりと分かりましたね。

凍結切片 削除/引用
No.3716-1 - 2010/12/20 (月) 19:35:29 - aa
胎児や成体の脳切片を切るさいにどのようにしたらキレイに垂直に切り出せるのでしょうか。

脳内影響を見るため試薬などを打ったのですが、切片にしたときに垂直に切れなかったため鮮明なトラクトが見れませんでした(斜めに切り出していたようです)

切片作製まではPFA固定→スクロース脱水→OCTコンパウンド包埋という流れです。包埋時は脳をたてて置き、小脳側が底にくるようにしてます。
実際に切り出すときは、切り出した面を目安に微調整をしているので左右対称にすることはできますが、上下の調節は困難な印象です。

みなさんは切片作製のさいにどのようにされてるのでしょうか?なにかいいアドバイスがあればよろしくお願いします。

4件 ( 1 〜 4 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を