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EMSA 膜への転写 トピック削除
No.3690-TOPIC - 2010/12/15 (水) 21:55:35 - LL
DIG標識したprobeを用いてゲルシフトを行っています。
ロシュのプロトコルでは、膜への転写は
1)セミドライ装置
2)コンタクトブロット(キャピラリー法)
を用いた方法が記載されています。
コンタクトブロットでは、ゲル上に膜と
3M paperをのせた後、20ー30分で転写が
完了すると記述されていますが、実際その時間で
効率良く転写されるのでしょうか?
コンタクトブロットでEMSAを行ったことの
あるかたのコメントを頂けましたら幸いです。
 
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比較してないけど 削除/引用
No.3690-3 - 2010/12/17 (金) 11:09:49 - ema
キャピラリー法しかした事がないですが、きれいに転写されます。
もう少し長くやった覚えが。
一番は平に!機材があるのですが、ひとによっては微妙に偏りをだして(まあそれなりに大丈夫ですが)なんとなく汚いデータをだすことに。

(無題) 削除/引用
No.3690-2 - 2010/12/15 (水) 22:08:03 - Actias
プローブの量に余裕があるなら、5,15,30,60分とかでやってみたら?
自分の条件を掴んでおくと、あとあと強みになりますよ。
(って、意味不明の気合論)

EMSA 膜への転写 削除/引用
No.3690-1 - 2010/12/15 (水) 21:55:35 - LL
DIG標識したprobeを用いてゲルシフトを行っています。
ロシュのプロトコルでは、膜への転写は
1)セミドライ装置
2)コンタクトブロット(キャピラリー法)
を用いた方法が記載されています。
コンタクトブロットでは、ゲル上に膜と
3M paperをのせた後、20ー30分で転写が
完了すると記述されていますが、実際その時間で
効率良く転写されるのでしょうか?
コンタクトブロットでEMSAを行ったことの
あるかたのコメントを頂けましたら幸いです。

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