新たにbe-ta MEを1/20量くらい追加してみたらどう。新たに加熱する必要はないよ。スメアになってきたということなので、溶かしたり凍らせたりしてる間に、サンプル中の還元剤が酸化されて効きが悪くなってきて蛋白質のチオールの再酸化とかが中途半端に起きているんじゃないかな。個々のバンドが変な感じにうすくてぼーっとしてないかな、それかバンドがいまいち締まりがない感じみたいな。だったらたぶんそうかも。というかそういうことあって還元剤追加したら直った、すごい昔だけど。SDS変性させててもプロテアーゼが働く事も例外的だけどあるから、分解の可能性ももしかしたらあり得るとおもうけどね。とりあえず大事なサンプルで何度も電気泳動するならば始めに少量ずつ分注して-80C保存したほうがいいよ。 |
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