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(無題) 削除/引用 No.356-11 - 2009/04/20 (月) 12:44:54 - 羞恥心 ＞通りがかりさん なるほど、口径がそんなに違うのですね！ 重要な情報をありがとうございました。 早速トライしてみます。 言葉足らずでした。 底に届かないかもと書いたのは、ウチの 1.5ml tube は底が round なので、吸い込み口が厳密には底に届かないんです（翼？の部分が引っかかってしまう）。

(無題) 削除/引用 No.356-10 - 2009/04/20 (月) 12:02:25 - 通りがかり > フラットだと 1.5ml tube の底まで先端が行かないと思うのですが、 どういう意味でしょう？長さは 7~8cmあるので普通にチューブの底に届きますが。先は柔らかいですけど、ビーズが溜まった中に突き刺して底に届くくらいの堅さはありますよ。 > ビーズを吸い込まなくて良いとかあるのでしょうか？ ラウンド型のローディングチップは口径が 0.5mm 程度なのに対し、フラット型では私が使っている物は 0.17mm です。詰まりが皆無ではないですが、かなり改善できるはずです。

(無題) 削除/引用 No.356-9 - 2009/04/20 (月) 10:31:26 - 羞恥心 ＞おおさん なるほど、アガロースゲルからＤＮＡを精製するような要領でやれば、確かにできますね！（何で今まで気づかなかったんだろう・・・） ＞通りすがりさん フラットではないタイプを使っております。 フラットだと 1.5ml tube の底まで先端が行かないと思うのですが、ビーズを吸い込まなくて良いとかあるのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.356-8 - 2009/04/20 (月) 09:26:44 - 通りがかり フラットタイプのローディングチップはお使いですか？

(無題) 削除/引用 No.356-7 - 2009/04/20 (月) 08:15:03 - おお >[Re:6] 羞恥心さんは書きました : > ＞おおさん > > すみません、書き忘れていました。 > 空のスピンカラムはどこでも１つ２００円以上はするので、使いたくないんです。 > じゃあホームメードでつくりますか。 エッペンの底にちいさめのニードルで 穴を開けてそこにグラスウールとかグラスビーズとか たぶん小さく切った濾紙を数枚しく とかして、そのエッペンのしたに 加工していないエッペンをかさね 2段にします。念のためパラフィルムで 2段のエッペンを固定して、上のエッペンに サンプルを乗せて遠心。サンプルを乗せる前に いちどバッファーを乗せて、遠心し、濾紙などを 湿らせておいた方がいいかもしれません。 遠心機、強さによっては上のエッペンが外側にはじき飛ばされることが ありますので、一応予備的にためして妥当な条件を 見つけてくささい。

(無題) 削除/引用 No.356-6 - 2009/04/20 (月) 06:13:13 - 羞恥心 ＞おおさん すみません、書き忘れていました。 空のスピンカラムはどこでも１つ２００円以上はするので、使いたくないんです。 チップの先を押し付けて吸って他のエッペンに移し、遠心という方法は良いなと思いました。 １％ＳＤＳ入りの液で泡だった場合、遠心で泡が消えるのか早速試してみます。 ありがとうございました。 ＞Ａさん コメントありがとうございました。 ＳＤＳゲルでの泳動をしたいので、できればローディングチップで吸い取りたいと思っています。 先を切ったチップでＳＤＳにアプライする場合、サンプルが上手くアプライできないことはないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.356-5 - 2009/04/20 (月) 03:20:30 - A ビーズ上に残っているかもしれない蛋白質はアプライしたくない ということですか？もしそうでないのであればサンプルバッファーの 量を調整してビーズごとウェルのせてしまえばいいかと思います。 ビーズ自身はゲルに入っていくことはありませんからウェル上に ビーズだけが残るはずで、以前そうしましたがバンドが乱れるなどの 問題が発生したことはありません。チップの先を少し切ればビーズ ごと吸い取れるはずです。

(無題) 削除/引用 No.356-4 - 2009/04/19 (日) 17:37:22 - おお 一度泡だっても良いから無理に吸って、違うチューブに移して、 スピンダウンしてから、もう一度吸ってあプライする。

(無題) 削除/引用 No.356-3 - 2009/04/19 (日) 17:33:23 - おお チップの先を底に押し付けた状態で吸う(ローディングチップでは厳しいか、、、) ん、ローディングチップだと大丈夫そうだけど。

(無題) 削除/引用 No.356-2 - 2009/04/19 (日) 17:29:16 - おお 0.2/0.4umのフィルターカップ(エッペンチューブ型)で、フィルターをかける。

sepharoseを吸わずに・・・ 削除/引用 No.356-1 - 2009/04/19 (日) 17:20:01 - 羞恥心 いつも参考にさせてもらっています。 くだらない質問で恐縮なのですが、sepharose beads を 1xSDS-PAGE buffer で直接加熱処理し、上清のほぼ全量をＳＤＳゲルにアプライしたいのですが、どうしてもチップに sepharose が詰まってしまい、無理に吸おうとすると泡だってしまいます。 みなさんは（全量をアプライしたい場合）どういう工夫をされてますでしょうか？ よろしくお願いします。

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