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FR225654 削除/引用 No.3559-7 - 2010/12/02 (木) 13:21:05 - TT http://www.nature.com/ja/journal/v58/n7/full/ja200559a.html このような例もあります。キットで直接測定しています。

専門家です 削除/引用 No.3559-6 - 2010/11/25 (木) 18:09:44 - 糖新生 糖尿病研究専門家の者です。一応CNS姉妹紙にも載せています。 肝細胞からの糖放出はH4IIEC肝細胞もしくはマウスかラットのprimary hepatocyteで、Glucose free DMEM (red colorのついていないものを購入ください)をベースにして、cAMPおよびデキサメサゾンの刺激存在下で、やります。スタートのときに、37C PBSで2-3回washしてから開始します。糖新生の基質として乳酸やピルビン酸を加えてやります。濃度は既報参照ください。 グルコース濃度が10 mg/dlとかのオーダーですので、Glucose oxidation Kitなどを使用して測ります。ちょっと前のPNASで、肝糖産生とPEPCK,G6Pase発現が必ずしもパラレルでないという論文も出ています。なので、ちゃんとグルコースをはからないと、Pck1やG6pcの発現だけではいいジャーナルはまずとってくれません。（というかPck1やG6pcもglucose free DMEMベースでcAMP,DEXいれて実験やってRNA抽出しないと、なかなかきれいな結果でません）もちろんin vitroで有望な結果でれば、マウスで肝臓にTgとかsiRNAとかやって、空腹血糖とか空腹インスリン濃度が変わるかどうかを調べるというステップになります。

有難うございます。 削除/引用 No.3559-5 - 2010/11/23 (火) 19:41:13 - 肝細胞を扱う初心者です。 は様 ご意見をいただき有難うございます。 いくつかHepatocyteをつかってGlucose　production assayを 行っていた論文をみたことがあったのですが ご指摘を受けていろいろ複雑なのがよくわかりました。 非常に勉強になりました。 有難うございます。

有難うございました。 削除/引用 No.3559-4 - 2010/11/23 (火) 19:29:36 - 肝細胞を扱う初心者です。 stu様 ご意見をいただき有難うございました。 直接Glucoseを測れればと思いましたが、 糖新生に関与するG6PやPEPCKのmRNAの上昇をみるのが 一番妥当なのですね。 勉強になりました。 有難うございます。

(無題) 削除/引用 No.3559-3 - 2010/11/23 (火) 19:26:59 - は うーんmedium中にグルコース豊富にあるからねえ。 一時的にグルコースフリーの培地に置換して、薬剤添加したところで まともな（in vivoを反映するような)糖新生のシグナリングを見るのは難しそう・・・。 それに、刺激によって新生された糖と、細胞内に蓄積されていた糖とどのように区別するのか？ まあ深く考えていないのだろうから、 stuさんが挙げられたような糖新生律速段階酵素群の発現変動に関与する薬剤のスクリーニングはするくらいなら可能だろうが・・・（これもin vitroにおいてはだけど）

(無題) 削除/引用 No.3559-2 - 2010/11/23 (火) 18:42:42 - stu 専門家ではないので、詳しくわかりませんが、少なくともそのような実験はみたことないっす。 普通に考えて、糖新生の亢進を見る場合は、G6PやらPEPCKのmRNA発現上昇をみるのが一番簡単な気がしますけども。

培養肝細胞を用いた糖新生評価について 削除/引用 No.3559-1 - 2010/11/22 (月) 12:51:01 - 肝細胞を扱う初心者です この度はお世話になります。 肝細胞を用いて研究を行う初心者です。 培養肝細胞に薬剤による刺激を負荷して 糖新生の程度の変化を評価したいのですが、 培養肝細胞から新生されたグルコースを培養上清を用いて 測定することはできるでしょうか？ その場合、何か特別な条件や添加すべき薬品などはあるでしょうか？ 非常に初心者の質問で申し訳ありませんが 宜しくお願いいたします。

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